一、急性大脑中动脉闭塞症局部溶栓疗法及脑缺血耐受时间的研究（论文文献综述）
宋扬扬[1]（2021）在《针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察》文中进行了进一步梳理目的:（1）在脑梗死模型大鼠中明确针刺提高脑梗死rt-PA静脉溶栓安全性的效应并探讨针刺调控RhoA/ROCK信号通路的机制。（2）在临床验证和观察针刺提高脑梗死患者rt-PA静脉溶栓安全性的效应,以期为广大脑梗死患者赢得更多的救治机会,为提高脑梗死溶栓安全性这一难题提供新思路、新方法。方法:一、实验研究:实验一、针刺提高脑梗死模型大鼠rt-PA静脉溶栓安全性的效应研究:将SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组。采用改良自体血栓栓塞法制备脑梗死大鼠模型,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组在脑梗死模型成功后的4.5h予rt-PA静脉溶栓;针刺+4.5h溶栓组在4.5h rt-PA静脉溶栓治疗后立刻予醒脑开窍针法进行针刺干预,留针30min,每日1次,7次为1疗程,治疗1个疗程;假手术组、模型组在脑梗死模型成功后的4.5h注射生理盐水;假手术组、模型组和4.5h溶栓组只给予相同的固定。观察针刺对各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、血红蛋白含量、EB含量和脑含水量百分比的影响。实验二、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究:采采用和实验一相同的模型、分组及干预方法,用Western blot检测RhoA/ROCK信号通路指标（RhoA、ROCK2、MLC）及BBB结构相关蛋白（Claudin5、ZO-1、Occludin）的表达,用 Real-time PCR 检测 RhoA、ROCK2 mRNA表达,用免疫荧光检测ZO-1、Claudin5以及MMP9蛋白的表达。二、临床观察:将脑梗死予rt-PA静脉溶栓的80例患者随机分为观察组和对照组,每组40例。对照组仅予4.5h溶栓时间窗内rt-PA静脉溶栓治疗,观察组在rt-PA静脉溶栓之后立刻给予醒脑开窍针刺法治疗,留针30min,每日针刺1次,7次为1疗程,连续治疗2个疗程,两个疗程之间间隔1天。比较两组患者的总有效率,NIHSS评分,sICH发生率,不良事件发生率,sICH相关指标（TC、LDL-C、MPV、PLT、D-二聚体、纤维蛋白原、CRP）,依从性。结果:一、实验研究1.针刺提高脑梗死模型大鼠rt-PA静脉溶栓安全性的效应研究（1）神经行为学评分:与模型组相比,4.5h溶栓组和针刺+4.5h溶栓组神经行为学评分均降低（P<0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组神经行为学评分降低（P<0.01）。（2）脑梗死体积百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组脑梗死体积百分比均减小（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组梗死体积百分比减小（P<0.05）。（3）BBB通透性:与模型组相比,4.5h溶栓组EB含量升高（P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组EB含量降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组EB含量降低（P<0.01）。（4）脑含水量百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组和针刺+4.5h溶栓组脑含水量百分比均降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组脑含水量百分比降低（P<0.05）。（5）脑出血性转化:与模型组相比,4.5h溶栓组血红蛋白含量升高（P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组血红蛋白含量差异无统计学意义（P>0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组血红蛋白含量降低（P<0.01）。2.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究（1）RhoA/ROCK信号通路指标:与模型组相比,4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均升高（P<0.01）;针刺+4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均降低（P<0.01）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组RhoA、ROCK2蛋白及mRNA表达均降低（P<0.01）。与模型组相比,4.5h溶栓组MLC蛋白表达升高（P<0.05）,针刺+4.5h溶栓组MLC蛋白表达降低（P<0.05）;与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组MLC蛋白表达降低（P<0.01）。（2）MMP9蛋白表达:与模型组相比,4.5h溶栓组MMP9蛋白表达升高（P<0.05）,针刺+4.5h溶栓组MMP9蛋白表达降低（P<0.05）。与4.5h溶栓组相比,针刺+4.5h溶栓组MMP9蛋白表达降低（P<0.01）。（3）ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达:与模型组相比,4.5h溶栓组ZO-1、Claudin5、Occludin 蛋白表达均降低（P<0.05,P<0.05,P<0.01）,针刺+4.5h溶栓组ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达均升高（P<0.05,P<0.05,P<0.01）。与 4.5h 溶栓组相比,针刺+4.5h 溶栓组 ZO-1、Claudin5、Occludin蛋白表达均升高（P<0.01）。二、临床观察1.两组治疗后总有效率的比较观察组总有效率为95%,对照组为88.57%,观察组高于对照组（P<0.05）。2.两组治疗后NIHSS评分的比较治疗后观察组和对照组NIHSS评分均较本组治疗前降低（P<0.05）,且观察组低于对照组（P<0.05）。3.两组sICH发生率的比较观察组sICH发生率为0%,对照组为10%,观察组低于对照组（P<0.05）。4.两组不良事件发生率的比较观察组不良事件发生率为0%,对照组为12.5%,观察组低于对照组（P<0.05）。5.两组sICH相关指标的比较治疗后观察组和对照组LDL-C水平、MPV和CRP水平与本组治疗前相比均降低（P<0.05）。治疗后观察组D-二聚体水平低于本组治疗前（P<0.05）。治疗后观察组PLT与纤维蛋白原水平均高于对照组（.P<0.05）,观察组D-二聚体、CRP水平低于对照组（P<0.05）。6.两组依从性的比较两组均完成临床观察,依从性均为100%（P>0.05）。结论:1.针刺可改善脑梗死大鼠溶栓后神经功能,减小脑梗死体积,减轻脑水肿程度,减轻溶栓后BBB破坏的加重和减少HT的发生,达到提高溶栓疗效和安全性的效应。2.针刺可通过抑制RhoA/ROCK信号通路途径、有效保护BBB,以提高脑梗死大鼠rt-PA静脉溶栓安全性。3.针刺及时介入可提高脑梗死患者rt-PA静脉溶栓的疗效,降低sICH的发生率,提高溶栓安全性。为临床提高脑梗死溶栓安全性的难题提供了新的思路和方法。
李中康[2]（2021）在《调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠TLR4/NF-κB通路的影响及证候研究》文中研究指明目的1.动物实验:观察调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死损伤大鼠体重、血脂水平、神经功能、脑梗死体积及TLR4/NF-κB信号通路相关炎症因子包括:Tol]样受体4（TLR4）、核因子-κB p65（NF-κBp65）、脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白介素-6（IL-6）等表达水平的影响,探讨其对大鼠神经损伤的保护作用和保护脑组织的机制。2.临床研究:探究血脂异常合并缺血性脑卒中患者不同证候间脑卒中病因分型（TOAST分型）特点及TLR4/NF-κB信号通路相关炎症因子包括:TLR4、NF-κBp65、转化生长因子-β激活的激酶1（TAK1）和IL-6等炎症因子水平差异,为中医药防治血脂异常合并缺血性脑卒中提供客观依据及辨证思路,为探究中药作用机理提供数据基础。方法1.动物实验:将72只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、调脂通脉解毒方低剂量组（以下简称低剂量组）、调脂通脉解毒方中剂量组（以下简称中剂量组）、调脂通脉解毒方高剂量组（以下简称高剂量组）和西药组,每组12只,适应性喂养1周后,尾静脉取血检测血脂。高脂饲料喂养6周制备高脂血症模型后,再次取血检测血脂,用线栓法致大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）建立脑梗死损伤模型,各组分别给予相应浓度的调脂通脉解毒方灌胃,西药组与尼莫地平溶液灌胃,模型组及假手术组用生理盐水灌胃,记录各组大鼠的神经功能缺损状况及评分。灌胃2周后用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色检测脑梗死体积,并取缺血侧大脑皮层组织,采用蛋白质印迹法（Western blot法）检测TLR4和NF-κB p65的表达情况,采用酶联免疫吸附法（Elisa法）检测大鼠脑组织中Lp-PLA2、TNF-α、hs-CRP、IL-6含量。2.临床研究:纳入2019年1月至2019年12月东直门医院及东方医院门诊及住院符合血脂异常合并缺血性脑卒中诊断的患者170例及健康体检者10例,根据四诊信息填写临床病例观察表进行证候评分确定中医证候,分析中医证候分布情况,比较不同中医证候间患者一般资料（包括年龄、性别）、脑卒中病因分型及血清TLR4、NF-κBp65、TAK1、IL-6炎症因子水平差异的特点。结果1.动物实验1)大鼠血脂检测显示:经高脂饲料喂养后,各组大鼠血脂水平较喂养前明显升高（P<0.05）,组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。灌胃后较模型组相比,各剂量组及西药组TC、TG、LDL-C水平均出现降低（P<0.05）,高剂量组HDL-C水平升高（P<0.05）,其中高剂量组较其他组TC、TG和LDL-C水平下降幅度更大（P<0.05）。西药组与低剂量组相比,在TC、TG和LDL-C水平上差异无统计学意义（P>0.05）,在 HDL-C水平上升高（P<0.05）。2)大鼠神经功能缺损结果显示:与模型组相比,调脂通脉解毒方各剂量组及西药组神经功能缺损评分均升高（P<0.05）。与低剂量组相比,中剂量组评分升高（P<0.05）,而高剂量组和西药组较其他各组升高更显着（P＜0.05）,两组之间无明显差异（P>0.05）。3)大鼠脑组织TTC染色显示:与假手术组相比,模型组、中药各剂量组及西药组均出现脑梗死,与模型组相比,各剂量组与西药组脑梗死体积均减少（P<0.05）,与低剂量组相比,中剂量组和高剂量组脑梗死体积减少（P<0.05）;与中剂量组相比,高剂量组脑梗死体积减少（P＜0.05）。高剂量组较西药组差别无统计学意义（P>0.05）。4)Western blot检测结果显示:与低剂量组相比,中、高剂量组及西药组TLR4水平降低（P＜0.05）;与中剂量组相比,高剂量组和西药组TLR4 水平降低（P<0.05）;高剂量组与西药组TLR4水平相比差异无统计学意义（P>0.05）。p-NF-κB p65表达水平比较,与低剂量组相比,中、高剂量组p-NF-κB p65水平降低（P<0.05）,西药组与低剂量组差异无统计学意义（P>0.05）。各剂量组间比较,高剂量组水平降低最多（P＜0.05）。5)Elisa检测结果显示:Lp-PLA2、TNF-α水平比较,与模型组相比,低剂量组表达水平差异无统计学意义（P>0.05）,中、高剂量组及西药组水平较模型组下降（P<0.05）,且高剂量组降低最多（P<0.05）。hs-CRP、IL-6水平比较,与模型组相比,各剂量组及西药组表达水平均降低（P＜0.05）,各剂量组间比较,高剂量组hs-CRP、IL-6水平降低最多（P<0.05）,与西药组相比差异无统计学意义（P>0.05）。2.临床研究1)中医证候分布特点:血脂异常合并缺血性脑卒中患者以痰瘀互结证最多（34.70%）,气虚血瘀证其次（21.76%）,其余各证候分布较少,分别为风痰阻络证（17.65%）、肝阳上亢证（14.12%）、痰热腑实证（11.76%）。2)性别、年龄分布特点:血脂异常合并缺血性脑卒中患者男性多于女性,平均年龄67.1±10.8岁。在各年龄段的分布中,其中65～80岁的患者占到48.2%,65岁以下患者占35.9%。40～65岁患者风痰阻络证居多（31.15%）,65～80岁患者以痰瘀互结证最多（53.66%）,80～90岁年龄段的患者气虚血瘀证居多（59.26%）。3)不同证候间脑卒中分型特点:TOAST分型在各中医证候间存在差异（P<0.05）,其中痰瘀互结证多表现为小动脉闭塞性脑卒中,而气虚血瘀证多表现为大动脉粥样硬化性脑卒中,其余各证候间脑卒中分型无明显差异。4)各证候炎症因子水平比较,与正常组相比,各证候组炎症因子表达水平均升高（P<0.05）。其中痰瘀互结证TLR4、TAK1、NF-κBp65表达量最高（P<0.05）,气虚血瘀证其次（P<0.05）。肝阳上亢证和痰热腑实证间差异无统计学意义（P>0.05）。各证候间IL-6水平比较,气虚血瘀证表达量最高（P<0.05）,痰瘀互结证其次,与风痰阻络证相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.调脂通脉解毒方可以调节高脂血症合并脑梗死大鼠血脂水平,改善神经功能评分,减少脑梗死体积,并能够减少脑组织中的NF-κB p65和TLR4蛋白的表达,降低Lp-PLA2、TNF-α hs-CRP、IL-6等炎症因子的水平,减轻炎症性损伤,改善脑梗死后神经功能缺损情况,提示其可能通过调节血脂、抑制TLR4/NF-κB通路对脑梗死后神经功能损伤发挥保护作用。2.血脂异常合并缺血性脑卒中患者的中医证候分布以痰瘀互结证和气虚血瘀证为主,不同证候间脑卒中病因分型存在差异,TLR4、TAK1、NF-κB p65、IL-6等炎症因子在不同中医证候中有不同的水平特点,与中医对血脂异常合并缺血性脑卒中病因病机的认识相符,可作为血脂异常合并缺血性脑卒中分型的客观依据。
姜思媛[3]（2021）在《针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究》文中认为目的:观察针刺对急性脑梗死大鼠溶栓后神经行为学、脑梗死体积、血脑屏障（BBB）通透性、脑含水量的影响,明确针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应;并从星形胶质细胞的途径探讨其作用机制。方法:本实验分为两部分。实验一:针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应研究。本研究采用改良的大鼠自体血栓栓塞法制备脑梗死模型,选用“醒脑开窍”针刺法为介入手段,尾静脉注射阿替普酶（rt-PA）为溶栓方法。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、4.5h溶栓组、6h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组,造模24h后观察针刺对各组大鼠神经行为学、脑梗死体积、BBB通透性、脑含水量的影响,明确针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应。实验二:针刺提高脑梗死溶栓安全性的机制研究。模型制备、介入手段、溶栓方法同实验一。在实验一的基础上,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组,造模24h后取材。运用Real-time PCR和Western Blot法分别检测各组大鼠大脑皮层中星形胶质细胞相关指标（胶质纤维酸性蛋白GFAP、水通道蛋白4AQP-4）的mRNA和蛋白表达,探讨针刺提高脑梗死溶栓安全性的作用机制。结果:1.各组大鼠神经行为学评分比较:造模后24h进行评分,模型组的神经行为学评分高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的神经行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。针刺+6h溶栓组的神经行为学评分均低于模型组和6h溶栓组（P＜0.05,P<0.01）。2.各组大鼠脑梗死体积百分比比较:模型组的脑梗死体积百分比高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的脑梗死体积百分比差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。针刺+6h溶栓组的脑梗死体积百分比均低于模型组和6h溶栓组（均P<0.05）。3.各组大鼠BBB通透性比较:模型组的EB含量高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的EB含量差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。6h溶栓组的EB含量高于模型组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组的EB含量均低于模型组和6h溶栓组（均P<0.01）。4.各组大鼠脑含水量百分比比较:模型组的脑含水量百分比高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的脑含水量百分比差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。6h溶栓组的脑含水量百分比高于模型组（P＜0.01）。针刺+6h溶栓组的脑含水量百分比均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05,P＜0.01）。5.各组大鼠大脑皮层GFAP的mRNA表达比较:根据Real-time PCR结果显示,模型组GFAP的mRNA表达水平高于假手术组（P＜0.01）。针刺+6h溶栓组GFAP的mRNA表达水平均低于模型组和6h溶栓组（均P＜0.01）。6.各组大鼠大脑皮层AQP-4的mRNA表达比较:根据Real-time PCR结果显示,模型组AQP-4的mRNA表达水平高于假手术组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组AQP-4的mRNA表达水平均低于模型组和6h溶栓组（均P＜0.01）。7.各组大鼠大脑皮层GFAP的蛋白表达比较:根据Western Blot结果显示,模型组GFAP的蛋白表达水平高于假手术组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组GFAP的蛋白表达水平均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05、P＜0.01）。8.各组大鼠大脑皮层AQP-4的蛋白表达比较:根据Western Blot结果显示,模型组AQP-4的蛋白表达水平高于假手术组（P＜0.05）。针刺+6h溶栓组AQP-4的蛋白表达水平均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05、P<0.01）。结论:1.在急性脑梗死4.5h时间窗内进行单纯溶栓治疗或针刺配合溶栓治疗,均具有较理想的脑保护效应且作用相仿。2.4.5h时间窗外进行脑梗死溶栓治疗,更易产生出血性转化、脑水肿等溶栓副作用。本研究表明,针刺及时介入后,在脑梗死发病6h进行溶栓,能够减轻溶栓并发症,仍具有安全性的效应。3.针刺能够下调缺血脑组织中GFAP、AQP-4的mRNA和蛋白的表达,表明针刺可通过抑制星形胶质细胞活化来实现提高溶栓安全性的效应。
刘影[4]（2020）在《CT血管造影联合CT灌注成像在急性脑梗死侧支循环及溶栓疗效评价中的应用》文中研究表明背景伴随着人们物质生活条件的日益提高,脑血管发生意外概率也越来越高,急性脑梗死以其较高的发病率、致残率以及致死率,已经给人们的日常工作、生活以及健康带来了非常大的困扰。在临床上,一些先进的诊断和治疗技术已经得到了非常广泛的应用,选择性的静脉溶栓治疗已经对脑梗死患者取得了显着的疗效。急性脑梗死有一个严格的时间窗,即在发病4.5小时以内,大部分的溶栓治疗是有效的,治疗的早晚决定了预后的关键。因此,对急性脑梗死患者采取积极有效的早期诊断方式是非常关键的,根据个体化差异选择合适的治疗方式及预测患者的治疗效果是非常重要的。目的运用CT血管造影（computed tomography angiography,CTA）评估急性脑梗死患者的侧支循环情况;通过分析溶栓治疗前后缺血半暗带区的参数改变及神经功能恢复情况,评估侧支循环对急性脑梗死溶栓治疗及神经功能的影响。方法筛选2017年1月1日-2019年6月1日期间来我院神经内科治疗的急性脑梗死患者50例作为研究对象,在发病的4.5小时以内完成头颅CT平扫、CT血管造影及CT脑灌注（computed tomography perfusion,CTP）检查,均由256排螺旋CT进行扫描,CT平扫排除脑出血,CTA证实为单侧大脑中动脉闭塞的脑梗死患者。所有的患者都应用重组组织型纤溶酶原激活物（recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA）进行静脉溶栓治疗。CTP检查筛选出存在缺血半暗带（ischemic penumbra,IP）的患者36例,通过CT血管造影最大密度投影（maximum intensity projection,MIP）将存在IP的患者分为良好侧支循环组与不良侧支循环组,其中良好侧支循环组20例,不良侧支循环组16例;分别记录两组患者的一般临床资料,比较两组患者在年龄、吸烟、肥胖、慢性疾病（糖尿病、高血压、高脂血症等）等危险因素有无显着差异;分析侧支循环对静脉溶栓治疗及预后评估的重要性;于静脉溶栓第7d用同样的机器及扫描条件进行CTP检查,记录缺血区脑组织溶栓治疗后各个参数值,分析及探讨侧支循环开放状况对溶栓治疗及预后评估的重要性。记录两组患者入院前美国国立卫生研究院卒中量表（national institute of health stroke scale,NIHSS）评分、溶栓后7d、14d NIHSS评分、溶栓后90d的改良Rankin量表（modified rankin scale,MRS）评分。结果在常规平扫CT中,只有21例的发病症状和体征与平扫的异常区相符合,阳性率是42.0%,有42例患者的CTP数据显示异常,阳性率是84.0%,所有CTP参数为异常的患者都与第1次常规CT或复查证实而得到的新发梗死的病灶区域相对应,并且和患者的临床症状、体征相符。CTA结果显示所有患者都是单侧大脑中动脉闭塞,对侧大脑中动脉正常或轻度狭窄。根据CTA-MIP图像分成良好循环组及不良侧支循环组。两组分别在年龄、血糖、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白（low densith lipoprotein,LDL）和高血压、吸烟等因素之间无明显的差异（均P>0.05）;而良好侧支循环组治疗前后的脑血容量（cerebral blood volume,CBV）和脑血流量（cerebral blood flow,CBF）值均高于不良侧支循环组（均P<0.05）,不良侧支循环组治疗前后的达峰时间（time to peak,TTP）和平均通过时间（mean transit time,MTT）值明显的延长（均P<0.05）;两组溶栓治疗后CBV和CBF都升高,良好组CBV、CBF值更高一些,MTT、TTP的值明显降低,良好侧支循环组更接近对侧健康组的数值。对入院时、溶栓治疗7d、14d的NIHSS评分及出院90d的MRS评分进行比较,良好组较不良组明显更低（均P<0.05）。结论（1）CTA和CTP能够早期诊断ACI,后处理图像及各个参数能够发现IP,为临床溶栓治疗提供依据。（2）CTA联合CTP能够有效的评估急性脑梗死患者的侧支循环以及溶栓治疗的效果。
栗亚楠[5]（2020）在《基于调控自噬探讨火针改善脑梗死模型大鼠神经功能的作用机制》文中认为目的观察火针疗法对脑梗死模型大鼠不同时间窗行为学、脑梗死体积百分比、脑血管内皮细胞形态结构、自噬过程关键蛋白表达的影响,从而探讨火针疗法改善脑梗死后大脑神经功能的作用机制。方法采用Excel随机法将150只SD大鼠随机分为假手术1d、3d、7d组;模型1d、3d、7d组;火针1d、3d、7d组,火针组及模型组采用改良自体血栓法制备大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠模型。火针组采用贺氏细火针,针刺百会、曲池、合谷、足三里、太冲穴,假手术组和模型组不予治疗性干预。之后在相应时刻对各组大鼠进行Longa行为学评分;采用TTC染色法全脑染色后拍照记录,对图像应用Image-Pro Plus 6.0软件测量并计算梗死体积百分比;采用光镜及透射电镜技术观察各组大鼠血管内皮细胞微观形态及超微结构变化;采用Western blot检测自噬发生蛋白（PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ、AKT）的表达。结果（1）行为学评分:假手术组评分结果显示均为0分,即无神经功能损害症状;与之相比,模型组大鼠神经功能Longa评分在三个时间点均明显升高,差异具有统计学意义（P=0.000<0.05）,出现对侧肢体屈曲、无力,行走时向对侧转圈、倾倒等神经缺损症状,随时间推移在3d和7d时评分逐渐降低,但差异无统计学意义;火针组Longa评分随时间推移出现明显下降,且与模型组比7d时明显降低,差异有统计学意义（P=0.015<0.05）。（2）脑梗死体积百分比:假手术组脑染色均显示无白色梗死区;与之相比,模型组与火针组大脑梗死区域明显可见,模型组梗死体积百分比随时间推移,在3d和7d时出现一定程度的增长趋势,但差异无统计学意义;火针组梗死区百分比在3d和7d时也有小幅增长,且三个时间点梗死百分比均小于模型组,但差异无统计学意义。（3）血管内皮细胞微观形态及超微结构:假手术组大鼠脑血管内皮细胞连接紧密而有序,呈完整无缝的带衬于血管内壁,细胞光滑呈梭形,细胞膜完整,胞浆丰富透亮,细胞器成分完整,细胞核大,核膜完整,核浆比例较小,核仁明显;模型组大鼠血管内皮细胞从血管内壁脱落,排列无序,聚集于管腔内,细胞肿胀,形态异常,胞膜完整性破坏,细胞器严重损害、丢失,细胞核肿胀,但随时间推移出现一定程度变化:聚集程度减轻,细胞及细胞核肿胀程度减轻,胞膜完整性逐渐恢复,细胞核、细胞器均有一定程度恢复;火针组大鼠经过火针治疗性干预后,血管内皮细胞形态基本恢复成梭形,胞膜完整性恢复,受损细胞器成分和细胞核均有改善,并逐渐恢复。（4）自噬发生情况:透射电镜观察显示火针组血管内皮细胞自噬发生情况明显,且在3d和7d时数量明显增加。大脑中动脉栓塞1d后,与假手术组比较,模型组PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白均有所增高,且随时间推移表达量增高更为明显,差异有统计学意义（P<0.05）,提示这些蛋白在大脑中动脉栓塞后被激活,表明自噬参与并贯穿于急性脑梗死发生动态过程中;火针疗法干预1d至3d后,自噬发生蛋白PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ均明显升高,趋势一直持续至7d,差异有统计学意义（P<0.05）。结论火针疗法可促进脑梗死大鼠神经功能恢复,其机制可能与上调自噬发生蛋白PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ的表达,调控血管内皮细胞自噬发生,进而改善血管内皮细胞损伤有关。
张新昌[6]（2020）在《针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究》文中研究指明目的:目前脑梗死最有效治疗方法是超早期溶栓,但须在4.5h时间窗内实施,否则极易破坏血脑屏障（BBB）而出现脑水肿及颅内溶栓出血性转化等并发症,导致死亡率增高,如能探寻到延长时间窗的方法,将会为患者赢得更多救治机会。针刺治疗脑梗死的疗效公认,然而早期针刺能否提高溶栓安全性,进而延长脑梗死溶栓时间窗,目前尚不明确。因此,本研究首先明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应,其次从细胞与分子水平探讨针刺提高脑梗死溶栓安全性、延长溶栓时间窗的作用机制。方法:本研究采用“醒脑开窍”针刺法,以改良的自体血栓栓塞性脑缺血模型为研究对象,rtPA为静脉溶栓手段。实验一:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、4.5h溶栓组、6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组、针刺+9h溶栓组。观察针刺干预对各组大鼠梗死体积、神经行为学评分、BBB通透性、颅内溶栓出血性转化及脑水肿的影响,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应。实验二:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组。采用Western blot、免疫荧光（IF）检测ERK1/2信号通路指标（MEK1/2、ERK1/2）、跨膜蛋白（Claudin5）、胞浆黏附蛋白（ZO-1）、细胞骨架蛋白（MAP-2）以及MMP9的蛋白表达;采用 Real time-PCR、Western blot 检测 NF-κB p65 的 mRNA 及蛋白表达;使用透射电镜观察各组BBB超微结构的变化;采用ELISA法检测缺血脑组织中炎症因子（TNF-α、IL-1β）的含量。实验三:将SD大鼠随机分为假手术组、6h溶栓组、6h溶栓组+ERK1/2信号通路抑制剂（U0126）组。采用Western blot检测ERK1/2、MMP9、NF-κB p65的蛋白表达变化。通过实验二、三,明确针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。结果:1、各组大鼠神经行为学评分的比较治疗后24h评分,与模型组相比,4.5h溶栓组神经行为学评分降低,差异有统计学意义（P<0.01）。时间窗外溶栓组（6h溶栓组、9h溶栓组）与模型组相比,神经行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组、6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组神经行为学评分均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。表明针刺可改善时间窗外溶栓大鼠的神经行为学评分。2、各组大鼠脑梗死体积的比较与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑梗死体积显着减小（P<0.01）;6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+9h溶栓组比模型组脑梗死体积显着增大（P<0.01,P<0.05）;针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,梗死体积显着减小（P<0.01）。表明针刺可减小时间窗外溶栓大鼠的脑梗死体积。3、各组大鼠脑出血性转化的比较与模型组相比较,6h溶栓组、9h溶栓组、针刺+9h溶栓组血红蛋白含量均显着升高（P<0.01）,说明超时间窗外溶栓会显着增加出血性转化风险。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,血红蛋白含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外单纯溶栓大鼠的脑出血性转化。4、各组大鼠BBB通透性的比较与模型组相比,时间窗内4.5h溶栓组Evans blue（EB）含量降低;时间窗外6h、9h溶栓组EB含量增加,其差异均具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比,针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组EB含量降低;针刺+9h溶栓组EB含量增加,其差异均具有统计学意义（P<0.01）。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,EB含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外单纯溶栓大鼠的BBB通透性。5、各组大鼠脑含水量的比较与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑含水量均显着降低（P<0.01）;时间窗外6h溶栓组、9h溶栓组脑含水量显着增加（P<0.01）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,脑含水量显着降低（P<0.01）。表明针刺可降低时间窗外溶栓大鼠的脑含水量。6、各组大鼠BBB超微结构的改变透射电镜显示:模型组BBB超微结构内皮细胞及基底膜明显肿胀变形且不规则,内皮细胞层间连接疏松,紧密连接遭到破坏。6h溶栓组BBB脑微血管内皮细胞及基底膜肿胀变形进一步加重,大量空泡及胞饮小泡形成,紧密连接断裂,BBB超微结构严重破坏。针刺+6h溶栓组BBB超微结构破坏减轻,其内皮细胞及基底膜肿胀减轻,形态有规则基本连续完整,紧密连接破坏明显减轻,表明针刺可改善脑梗死溶栓大鼠BBB超微结构的破坏。7、针刺对脑梗死溶栓大鼠ERK1/2信号通路的作用WB、IF结果显示:模型组与假手术比,p-MEK1/2/t-MEK1/2、p-ERK1/2/t-ERK1/2均显着增加（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与6h溶栓组、模型组相比,p-MEK1/2/t-MEK1/2、p-ERK1/2/t-ERK1/2均显着降低（P<0.0 1）。表明针刺可抑制时间窗外溶栓大鼠E Rκ1/2信号通路的激活。8、各组大鼠MMP9的表达比较WB、IF结果显示:与假手术相比,模型组MMP9表达增加（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,MMP9进一步增加（P<0.05）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,MMP9表达显着降低（P<0.01）。提示针刺可下调时间窗外溶栓大鼠MMP9的蛋白表达。9、各组大鼠ZO-1、Claudin5、MAP-2的表达比较WB、IF结果显示:与假手术相比,模型组ZO-1、Claudin5、MAP-2蛋白表达均降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,ZO-1、Claudin5、MAP-2的表达进一步降低（P<0.05）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,ZO-1、Claudin5、MAP-2蛋白表达增加,差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.01）。提示针刺可上调时间窗外溶栓大鼠ZO-1、Claudin5、MAP-2 的蛋白表达。10、各组大鼠NF-κB p65的表达比较WB、RT-PCR结果显示:与假手术相比,模型组NF-κB p65mRNA和蛋白表达水平显着升高（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平进一步升高（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均显着降低（P<0.01）。表明针刺可下调时间窗外溶栓大鼠NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平。11、各组大鼠TNF-α和IL-1β的含量比较ELISA结果显示:与假手术相比,模型组大鼠脑组织TNF-α、IL-1 β含量显着升高（P<0.01）;6h溶栓组与模型组比,TNF-α、IL-1β含量进一步升高（P<0.01）;针刺+6h溶栓组分别与模型组、6h溶栓组相比,TNF-α、IL-1 β含量显着降低（P<0.01）。表明针刺可降低时间窗外溶栓大鼠脑组织炎症因子TNF-α和IL-1 β的含量。12、ERK1/2信号通路对MMP9、NF-κB p65表达的影响WB结果显示:与假手术相比,6h溶栓组p-ERK1/2、MMP9、p-NF-κB p65表达均显着增加,差异具有统计学意义（P<0.01）;与6h溶栓组比,6h溶栓+U0126组大鼠p-ERK1/2、MMP9、p-NF-κB p65表达均显着降低（P<0.01）。表明ERK1/2信号通路位于MMP9、NF-κB p65的上游,能够调控其蛋白表达水平。结论:1、针刺及时介入,能够减轻溶栓并发症,提高溶栓安全性,发挥延长脑梗死溶栓时间窗的效应,本实验研究表明,针刺可延长该安全时间窗至6h。2、针刺能够抑制ERK1/2信号通路的激活,进而下调MMP9以及NF-κB p65的表达,上调大鼠血脑屏障结构相关蛋白（Claudin5、ZO-1、MAP-2）的表达,并降低脑组织中炎症因子（TNF-α、IL-1 β）的含量,改善血脑屏障的破坏,表明针刺是通过调控ERK1/2信号通路来实现延长脑梗死溶栓时间窗效应的。
慕经纬[7]（2020）在《MiR-532-5p对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制研究》文中提出目的:脑卒中是常见的脑血管病之一,具有发病率高,致死率及致残率高的特点。尽管目前已有的溶栓疗法和新兴的血管内介入治疗可以在一定程度上开通闭塞的血管,如何有效的预防和治疗卒中后的缺血性脑损伤仍然是临床上的难点。小分子RNA（microRNA,miRNA）的长度大约在20-25个核苷酸左右,属于小的非蛋白编码RNA家族的一种。它们可与靶基因的mRNA相结合,然后导致mRNA降解或转录受到抑制。报道称在缺血后的脑组织内,有超过20%的miRNA表达发生变化,提示miRNA可能参与了脑卒中的发生和发展过程。近来,有研究发现一些miRNA可能对脑缺血性损伤具有保护作用。在许多中枢神经系统疾病中均发现了miR-532-5p的表达变化,如多发性硬化、肌萎缩侧索硬化及脑出血等。而在缺血性脑卒中患者的外周血中,发现miR-532-5p表达水平显着减低。但miR-532-5p在中枢神经系统疾病尤其是缺血性脑卒中具有什么作用目前尚不知晓。体外研究发现,高表达miR-532-5p抑制了缺氧后H9c2细胞的凋亡,是否miR-532-5p对缺氧后的脑损伤具有类似的保护作用目前仍不清楚。同源磷酸酶-张力蛋白基因（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN）是被认为是一种癌症抑制因子,主要通过去磷酸化3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate,PIP3）,抑制PI3K/Akt信号通路的激活来发挥作用。已有研究证实PTEN与缺血性脑损伤过程的调节相关。同时,也有研究发现miR-532-5p也可通过影响PI3K/Akt信号通路对细胞凋亡过程进行干预。同时,通过生物信息学分析,我们预测PTEN可能是miR-532-5p的下游靶基因之一。因此,miR-532-5p也许可以通过PTEN/PI3K/Akt信号通路来对卒中后脑缺血性损伤产生影响。在本研究中,我们通过小鼠大脑中动脉闭塞模型对miR-532-5p对缺血性卒中的影响进行了观察,然后我们在离体实验中研究了miR-532-5p对小鼠脑神经瘤细胞系（mouse neuroblastoma cells,N2a）经历糖氧剥夺过程的影响,并对miR-532-5p对PTEN和Akt的影响进行了进一步探讨。方法:1.实验动物:雄性C57BL/6小鼠（8周龄）,适应性喂养一周后随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（MCAO）、模型+Negative control mimic组（MCAO+NC mimic）和模型+miR-532-5p mimic组（MCAO+miR-532-5p mimic）。2.侧脑室注射:根据小鼠脑立体定位图谱,确定穿刺位置,根据组别不同经右侧脑室内注射相应试剂。3.大脑中动脉闭塞模型:侧脑室注射24小时后,采取线栓法制备小鼠大脑中动脉闭塞模型。假手术组除不进行线栓插入外余步骤与其他各组相同。4.神经功能缺损评分:在缺血再灌注24小时后,采用18点评分系统对各组小鼠进行假手术或者缺血再灌注后神经功能损伤的评分。5.TTC染色和梗死体积的测定:过量麻醉处死小鼠,迅速取脑后将脑组织用2%TTC染液进行染色,随后拍照,计算梗死体积。6.细胞培养、转染及糖氧剥夺过程:按实验分组接种细胞:对照组（Control）、糖氧剥夺组（OGD）、糖氧剥夺+NC mimic组（OGD+NC mimic）、糖氧剥夺+miR-532-5p mimic组（OGD+miR-532-5p mimic）。培养后进行转染,转染完成经历糖氧剥夺过程。对照组不经历该过程。7.Nissl及TUNEL染色:采用Nissl染色的方法检测坏死的神经元及脑损伤情况。采取TUNEL染色的方法检测凋亡的细胞。8.总RNA提取及实时定量PCR:在提取了样本的总RNA后,测定总RNA的纯度及浓度。随后将RNA样本逆转录为cDNA然后进行实时定量PCR过程。PTENmRNA及miR-532-5p的相对表达量通过2-ΔΔCt的方法计算得出。9.Western blot:脑缺血半暗带内PTEN、p-Akt、Akt的表达水平及N2a细胞内PTEN、p-Akt、Akt、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP及Bcl-2的表达水平通过Western blot的方法进行检测。10.细胞活力测定:接种细胞至96孔板,培养后于37℃以CCK-8溶液孵育2小时,随后测定450 nm处的光密度值。11.双荧光素酶检测:构建荧光素酶报告基因质粒,将报告质粒及miR-532-5p mimic或NC mimic共转染293T细胞,随后对荧光素酶活性进行检测。12.统计分析:所测数据结果均用?±s（均数±标准差）表示,用双尾无配对学生t检验及One-way ANOVA分析结果,事后分析采用Tukey法。P值小于0.05认为有统计学意义。结果:1.小鼠大脑中动脉缺血模型脑内miR-532-5p及PTEN的表达变化RT-qPCR检测结果显示与假手术组相比,MCAO组脑缺血半暗带内miR-532-5p表达水平显着下降（p<0.001）,而PTENmRNA的表达水平明显升高（p<0.001）。2.MiR-532-5p减轻了小鼠脑卒中后的缺血性脑损伤与假手术组相比,MCAO组小鼠神经功能缺损评分明显下降,而MCAO+miR-532-5p mimic组神经功能缺损评分较MCAO组升高（p<0.001）。与MCAO组相比,MCAO+miR-532-5p mimic组的梗死体积有所减小（p<0.001）。Nissl染色结果显示,与Sham组相比,MCAO组缺血半暗带内凋亡坏死的神经元数量明显增加,而MCAO+miR-532-5p mimic组鼠脑缺血性半暗带内凋亡坏死的神经元数量较MCAO组有所减少（p<0.001）。MCAO组小鼠脑缺血半暗带内TUNEL染色阳性的细胞数明显高于Sham组,而MCAO+miR-532-5p mimic组脑组织同部位TUNEL染色阳性细胞数较MCAO组减少（p<0.001）。3.MiR-532-5p促进了小鼠大脑中动脉缺血模型脑内PI3K/Akt信号通路的激活MCAO组脑缺血半暗带内PTEN蛋白的表达水平明显高于Sham组,应用miR-532-5p mimic后,脑缺血半暗带内PTEN蛋白表达水平所有下降（p<0.001）。MCAO组的p-Akt的蛋白表达水平明显低于Sham组,应用miR-532-5p mimic后,脑缺血半暗带内p-Akt的蛋白表达水平较MCAO组上升（p<0.001）。同时RT-qPCR结果显示,MCAO+miR-532-5p mimic组脑组织内miR-532-5p表达较MCAO组明显上调（p<0.001）。同蛋白表达变化一致,MCAO后PTENmRNA的表达升高,而应用miR-532-5p mimic后,抑制了MCAO后PTENmRNA的表达变化（p<0.001）。4.MiR-532-5p减轻了经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞的凋亡与对照组相比,OGD组N2a细胞内miR-532-5p表达明显下降（p<0.01）,而OGD+miR-532-5p mimic组细胞内miR-532-5p表达水平较OGD+NC mimic组和OGD组升高（p<0.001）。CCK-8检测发现OGD组N2a细胞活力明显下降,而OGD+miR-532-5p mimic组细胞活力较OGD+NC mimic组及OGD组活力增强（p<0.01）。TUNEL检测发现,OGD组凋亡细胞较对照组增多,而OGD+miR-532-5p mimic组凋亡细胞数较OGD+NC mimic组及OGD组减少（p<0.001）。Western blot结果显示,OGD组细胞内Bax、cleaved caspase-3及cleaved PARP蛋白表达水平升高而Bcl-2蛋白表达水平下降（p<0.001）。而转染miR-532-5p mimic则减轻了OGD后N2a细胞内Bax、cleaved caspase-3及cleaved PARP蛋白表达水平的升高,提高了Bcl-2蛋白表达水平（p<0.05）。5.MiR-532-5p促进了经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞内PI3K/Akt信号通路的激活Western blot检测结果显示,OGD组细胞内PTEN蛋白表达水平明显升高,而转染miR-532-5p mimic则抑制了OGD后N2a细胞内PTEN蛋白表达水平的升高（p<0.001）。相反地,OGD组细胞内p-Akt蛋白的表达水平降低,而转染miR-532-5p mimic升高了OGD后N2a细胞内p-Akt蛋白的表达水平（p<0.001）。6.PTEN被证实为miR-532-5p的下游靶基因之一双荧光素酶检测结果显示miR-532-5p mimic抑制了包含PTEN-WT-seed1及PTEN-WT-seed2的荧光素酶报告载体的荧光活性（p<0.05）,而NC mimic却无上述作用。针对包含PTEN-MUT-seed1及PTEN-MUT-seed2的荧光素酶报告载体,miR-532-5p mimic却没有显示抑制荧光活性的作用（p>0.05）。转染了miR-532-5p mimic的N2a细胞miR-532-5p的表达明显升高,而转染了miR-532-5p inhibitor的N2a细胞miR-532-5p的表达明显下降（p<0.001）。RT-qPCR及Western blot检测均发现miR-532-5p mimic可造成N2a细胞内PTENmRNA及PTEN蛋白表达水平减低,而miR-532-5p inhibitor可使N2a细胞内PTENmRNA及PTEN蛋白表达水平升高（p<0.001）。这些结果均证实PTEN为miR-532-5p的下游靶基因之一。7.过表达PTEN减弱了miR-532-5p对经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞的保护作用CCK-8及TUNEL检测均发现,在转染了miR-532-5p mimic及经历OGD过程后,过表达PTEN的N2a细胞与转染了空白质粒的N2a细胞相比,细胞活力下降更加明显（p<0.05）,细胞凋亡数量更多（p<0.001）,PTEN蛋白的表达水平更高（p<0.001）,p-Akt蛋白表达水平更低（p<0.001）。结论:1.本实验发现miR-532-5p可以减少脑卒中后的梗死体积,改善神经功能缺损,减轻梗死后的细胞凋亡。2.MiR-532-5p减轻了经历糖氧剥夺后的N2a细胞的凋亡及细胞活力下降。3.证实了PTEN为miR-532-5p的下游靶基因之一。4.我们发现miR-532-5p可能是通过与靶基因PTEN相结合,抑制了PTEN的表达,进一步激活了PI3K/Akt信号通路,对脑缺血性损伤发挥了保护作用。
叶宏[8]（2019）在《预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究》文中研究表明[目 的]观察自主跑轮预适应、缺血后适应以及两者联合应用对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用有无差异,结合氧化应激指标、细胞凋亡因子的检测,探寻可能的潜在调控机制。[方 法]实验由三个部分组成:第一部分实验动物小鼠分为5组:1.假手术组。2.脑缺血再灌注损伤模型组。3.缺血后适应组。4.自主跑轮预适应组。5.自主跑轮预适应联合后适应组。在第一部分实验结果的基础上设定第二部分实验分组:小鼠分为3组:1.假手术组。2.缺血后适应组。3.自主跑轮预适应联合后适应组。为验证第一、二部分的实验推论,将第三部分实验动物分为4组:1.缺血后适应组。2.自主跑轮预适应联合后适应组。3.自主跑轮预适应+后适应-PI3K抑制剂组。4.自主跑轮预适应+后适应-STAT3抑制剂组。实验采用神经功能缺损评分表,检测小鼠神经功能障碍评分;水迷宫检测认知功能;TTC实验检测脑梗死灶体积;分子生物学系列实验检测氧化应激生化指标以及神经元凋亡情况;细胞免疫的改变,采用Western blot检测凋亡、信号通路相关因子的蛋白表达。[结 果]第一部分实验:与脑缺血再灌注组比较,自主跑轮预适应改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积的作用不明显,后适应显着改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积,自主跑轮预适应联合后适应进一步增强改善小鼠脑缺血/再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积的作用,明显强于单独的预适应或后适应。与脑缺血再灌注组比较,预适应略有升高超氧化物歧化酶（SOD）活性和降低丙二醛（MDA）含量的作用,后适应能显着升高脑组织中SOD活性和降低MDA含量,自主跑轮预适应联合后适应,升高脑组织SOD活性,降低MDA含量的作用进一步增强,明显强于单独的自主跑轮预适应或后适应。与模型组比较,自主跑轮预适应减少缺血区脑组织的神经细胞凋亡数量不明显,后适应明显减少神经细胞凋亡数量,自主跑轮预适应联合后适应减少神经元细胞凋亡的作用进一步增强,明显强于单独的自主跑轮预适应或后适应。Western blot检测凋亡相关因子的蛋白表达,与脑缺血再灌注组比较,其中促凋亡因子Bax、Caspase-3的蛋白表达,预适应联合后适应的表达减弱,自主跑轮预适应或缺血后适应的表达无明显统计学意义;抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达,预适应联合后适应的表达增强,自主跑轮预适应或缺血后适应的表达无明显统计学意义。第二部分实验:Western blot检测信号通路相关因子的蛋白表达,其中PI3K、STAT3的蛋白表达,缺血后适应升高PI3K、STAT3活性。自主跑轮预适应和后适应联合干预提升PI3K、STAT3通路活性强于单独的后适应。第三部分实验:分别使用PI3K抑制剂LY294002、STAT3抑制剂SH454后,自主跑轮预适应联合后适应的脑保护作用明显减弱,表现为:神经功能评分降低,认知功能减退,脑梗死体积增大,TUNEL检测的凋亡细胞数量增多,促凋亡因子线粒体内细胞色素C、Bax、Caspase-3的蛋白表达增强,抗凋亡因子胞质内细胞色素C、Bcl-2的蛋白表达减弱。[结 论]1.后适应对小鼠脑缺血/再灌注损伤有保护作用,自主跑轮预适应联合后适应能进一步增强上述作用。2.自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用的增强可能依赖于激活抗氧化、抗凋亡的PI3K和STAT3信号通路。3.分别使用PI3K、STAT3抑制剂后,自主跑轮预适应联合后适应的脑保护作用明显减弱。
闫丽[9]（2019）在《猴急性脑缺血模型的构建与超声成像评价》文中认为第一部分猴局部急性脑缺血模型的构建背景:脑缺血具有很高的发生率、致残率和致死率,严重威胁着人类的健康。建立与临床特征最相符的脑缺血动物模型,对其病理改变和临床研究具有重要意义。目前,对于脑缺血模型的研究主要建立于啮齿类动物、兔子及狗上。猴子与人类接近,但由于购买程序复杂、成本高,介人手术及配套检查要求高、药品及设备使用费用高,因此建模中使用较少。临床上,脑缺血发病主要由血栓栓塞引起,且约85%的脑缺血都是由血栓栓塞大脑中动脉（middle cerebral artery,MCA）引起。因此,建立一种理想的脑缺血动物模型,反映人体临床特征是至关重要和必要的。目的:构建恒河猴局部急性脑缺血的模型,为脑缺血的早期诊断、治疗与评价提供理想的实验模型及研究方法。方法:选择8只健康恒河猴,术前行CT平扫及介入血管造影排除脑血管及颅内病变并对血管及其走形进行评估;在DSA引导和监测下,经股动脉将微导管插入至MCA M1分支,再将自体白色血栓导入,阻断血流。栓塞完成后及栓塞后24h,用DSA、MRI成像进行评估。栓塞24h后,处死2只猴子,进行灌注、固定。两周后,开颅取脑行病理学检查。结果:1例在插管过程中死亡,7例恒河猴脑缺血模型成功构建。建模成功后,自体白色血栓被导入至MCA M1段,血流阻断,相应部位脑缺血形成。栓塞即刻及栓塞后24h,DSA、MRA提示MCA闭塞,MRI多序列成像显示急性局部脑缺血病灶。病理大体标本及HE染色显示深部脑组织梗死病灶形成,MCA分支内可见血栓,梗死灶与正常脑组织界限清楚。结论:用自体血栓介入法可建立理想有效的猴局部急性脑缺血模型,对脑缺血疾病的相关基础和临床研究有重要的应用价值。MRI、DSA可对建模效果进行评价,确保建模的精准性和有效性。第二部分超声在猴急性脑缺血模型中的评价作用背景:超声医学发展飞速,超声影像技术在脑血管疾病诊治中的作用也越来越重要。新型的颅脑声学造影、颅脑三维成像、能量多普勒显像以及二维多普勒显像等,使得脑血管病变研究技术实现了较大创新。临床多年以来,颅脑血管病变的判断以DSA、CT、MRI检查居多。DSA虽是诊断缺血性脑血管病的“金标准”,但其有创伤且多配合介入治疗;常规的MRI不能早期发现小的梗死灶,尤其是在发病6h内的病灶,同时不方便便携,往往不能配合床边诊治。因此,我们采用超声对脑栓塞动物模型进行诊断,探讨其在脑栓塞动物模型中检测与评估作用。由于恒河猴与人类不同的生物学特性,如体积小、颅内血管细以及颞骨厚小等,且考虑到声学骨窗不足（inadequate acoustic bone windows,IABW）等特点,此章节中,我们选取经颅彩色超声检查（transcranial color-coded sonography,TCCS）和经颅超声造影检查（contrast-enhanced transcranial sonography,CE-TS）进行建模前、后评价,探讨超声在急性脑缺血模型中的的成像特点及评价作用。目的:探讨超声在恒河猴局部脑缺血模型中的评价作用。方法:选择8只健康恒河猴,术前行CT平扫及介入血管造影排除脑血管及颅内病变并对血管及其走形进行评估;模型构建方法同实验一部分。猴子取侧卧位,选取颞窗为透声窗,采用TCCS及CE-TS对猴子建模前、后的颅内血管进行超声检查。结果:栓塞前,TCCS清晰显示MCA,其血流充盈佳,并可录得正常低阻MCA频谱;CE-TS示:造影剂充盈良好,不仅显示MCA,还可显示清晰完整的大脑动脉环结构。栓塞后,TCCS显示MCA内未见明显血流信号通过,且录不到正常动脉频谱;CE-TS显示,大脑中动脉局部造影剂充盈缺损。病理大体标本及HE染色显示深部脑组织梗死病灶形成,大脑中动脉分支内可见血栓,梗死灶与正常脑组织界限清楚。结论:TCCS和CE-TS可实时、动态评价颅内大动脉。在脑栓塞时,又可给予快速、便捷的诊断及评价,在脑缺血疾病的研究中有着切实的临床价值。第三部分超声超分辨成像技术在猴脑血管的应用初探（与西安交通大学合作课题的共同研究成果）背景:从我们第二部分的研究发现,超声仅对颅内的大血管等显示较理想,对于颅内的微小血管及末端血管显示不佳,即使借助了造影剂的增强显示作用,成像依旧不理想。近年来,超分辨成像技术取得了理论上的重大进展。目前国际上最新常用的超快平面波超声多普勒脑功能成像[1]和基于超声造影微泡的超分辨成像技术[2]已推进到能对小鼠等小动物脑小血管及血流进行成像,但还未对猴与更大的活体动物脑微小血管成像。在国内,超分辨成像技术取得了一些初步研究成果,其在大动物的基础实验和临床实验甚少。近年来,我们与西安交通大学进行联合研究,尝试探索这项新技术在大型动物脑血管病诊断中的应用与性能评价。目的:用超分辨微泡成像技术对恒河猴颅内血管进行成像,探索其成像特点及较传统经颅超声的成像优势。方法:首先,通过模体仿真验证超分辨成像技术的有效性和可行性,在离体实验基础上,对该成像参数进行相应调整。最后,采用2只恒河猴进行活体脑微小血管成像实验。结果:离体实验表明,相对于传统的特征空间自适应波束所合成的超快速主动空化成像,超分辨成像的计算复杂度明显降低,且轴向分辨率增益提高3倍,空化组织比提高2d B;相对于常规平面波成像,超分辨成像对脑微小血管的辨识内径可达到1mm,甚至0.7 mm,且能提取到其血流信息。与此同时,造影噪声比提高了5.625d B,分辨率提高了约30倍。恒河猴实验的结果表明,超分辨微泡成像对脑微小血管成像的最佳分辨率可达到微米级别,且成像深度超过35mm。结论:超分辨成像技术能够实现对组织损毁过程中微泡的高分辨率、快速计算的监控成像。该高空时分辨成像方法也将成为本文后续微泡成像研究的基础,也为非侵入性的经颅超声临床应用提供了重要的实验依据。
武晓娜[10]（2019）在《头穴丛刺法对急性局灶性脑缺血大鼠Cdc42、GFAP蛋白表达的影响》文中认为目的观察头穴丛刺法对急性局灶性脑缺血大鼠不同时间窗神经功能评分及Cdc42、GFAP蛋白表达的影响,从蛋白角度探讨头穴丛刺法治疗缺血性脑卒中可能的作用机制。方法将54只大鼠随机分为假手术组（A）、模型组（B）、针刺组（C）,每组18只,各组再按不同时间窗分为24h、7d、14d三个亚组,每组6只。B组、C组采用改良线栓法制备大脑中动脉梗阻（MCAO）大鼠模型,A组制备假手术模型。C组用头穴丛刺法进行干预,A组、B组不予治疗性干预。在术后4h及24h、7d、14d时间窗进行大鼠Zea-Longa神经功能评分;运用非标记蛋白质组学相对定量技术检测并鉴定各时间窗MCAO大鼠脑组织Cdc42、GFAP蛋白的表达,观察头穴丛刺法对Cdc42、GFAP蛋白表达的影响,探讨头穴丛刺法治疗脑缺血的可能的作用机制。结果1.神经功能评分组间比较:术后4h,模型组（B组）、头穴丛刺法组（C组）与假手术组（A组）比较,差异均有统计学意义（p<0.05）;头穴丛刺法组（C组）与模型组（B组）比较,无统计学差异（p>0.05）。术后24h、7d、14d时间窗,与假手术组（A组）相比,模型组（B组）和头穴丛刺法组（C组）神经功能评分明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。24h头穴丛刺组（C）与模型组（B）相比,评分无明显变化,差异无统计学意义（p>0.05）。7d、14d头穴丛刺组（C）与模型组（B）相比评分明显下降,差异有统计学意义（p<0.05）。组内比较:模型组（B）7d组、14d组与24h组相比较,评分无明显变化,差异无统计学意义（p>0.05）;14d组相较于7d组评分无明显变化,差异无统计学意义（p>0.05）。组内比较:头穴丛刺组（C）14d组与24h组相比较,评分显着降低,差异有统计学意义（p<0.05）。14d组与7d组比较、7d组与24h组比较评分有所减少,但无统计学差异（p>0.05）。2.Cdc42、GFAP蛋白的表达Cdc42蛋白的表达在24h时间窗,模型组（B组）与假手术组（A组）相比Cdc42蛋白的表达明显下降,差异有统计学意义（p<0.05）;头穴丛刺组（C组）与模型组（B组）相比蛋白表达明显升高,呈较高水平表达趋势,差异有统计学意义（p<0.05）。7d、14d时间窗,各组蛋白表达无明显差异,差异无统计学意义（p>0.05）。GFAP蛋白的表达在24h时间窗,模型组（B组）与假手术组（A组）相比GFAP蛋白的表达明显下降,差异有统计学意义（p<0.05）;头穴丛刺组（C组）与模型组（B组）相比蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。在7d时间窗,模型组（B组）与假手术组（A组）相比蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）;头穴丛刺组（C组）与模型组（B组）相比蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。在14d时间窗,模型组（B组）与假手术组（A组）相比蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）;头穴丛刺组（C组）与模型组（B组）相比蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（p<0.05）。结论1.头穴丛刺法可以明显降低MCAO大鼠神经功能评分,能够改善大鼠运动障碍,对脑缺血大鼠神经功能恢复有着明显的促进作用。2.急性局灶性脑缺血后Cdc42蛋白表达明显减少,经头穴丛刺法干预后蛋白表达明显上升,表明头穴丛刺法能够促进MCAO大鼠Cdc42蛋白在脑缺血极早期的表达,并可能是通过调控神经细胞的分裂、迁移,促进受损神经元轴突修复及再生、减轻缺血后神经损害,从而发挥脑保护作用。3.急性局灶性脑缺血后GFAP蛋白表达明显减少,经头穴丛刺法干预后蛋白表达明显上升,表明头穴丛刺法能够促进脑缺血后GFAP蛋白的表达,改善星形胶质细胞活性,增加神经细胞缺血缺氧耐受性,从而发挥神经保护作用。
二、急性大脑中动脉闭塞症局部溶栓疗法及脑缺血耐受时间的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性大脑中动脉闭塞症局部溶栓疗法及脑缺血耐受时间的研究（论文提纲范文）
（1）针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表(按在文中出现的先后排序) |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.脑梗死流行病学资料 |
| 2.现代医学对脑梗死发病原因及机制的认识 |
| 3.中医对脑梗死(中风)病名及病因病机的认识 |
| 3.1 中风病名的历史沿革 |
| 3.2 病因病机 |
| 4.脑梗死治疗 |
| 4.1 现代医学治疗 |
| 4.2 中医治疗 |
| 5.针刺治疗脑梗死机制 |
| 6.本研究科学假说形成的理论依据 |
| 6.1 脑梗死溶栓疗法的优势及存在的并发症 |
| 6.2 脑梗死后BBB的破坏是溶栓并发症发生的病理基础 |
| 6.3 有效防控溶栓后BBB破坏的加重是减少溶栓并发症发生的前提 |
| 6.4 调控RhoA/ROCK信号通路是减轻溶栓后BBB损伤加重的关键路径 |
| 6.5 针刺是减轻溶栓后BBB损伤的有效途径 |
| 6.6 “针刺抑制RhoA/ROCK信号通路减少脑梗死rt-PA静脉溶栓所致的HT发生”科学假说的提出 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的效应研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器及设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 改良的大鼠自体血栓栓塞型模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 神经行为学评分 |
| 2.6 脑梗死体积测定 |
| 2.7 BBB通透性的测定 |
| 2.8 脑含水量的测定 |
| 2.9 脑出血性转化的测定 |
| 2.10 统计学方法 |
| 2.11 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 模型制备过程中的脑血流量变化 |
| 3.2 各组大鼠神经行为学评分的比较 |
| 3.3 各组大鼠脑梗死体积的比较 |
| 3.4 各组大鼠BBB通透性的比较 |
| 3.5 各组大鼠脑含水量的比较 |
| 3.6 各组大鼠脑出血性转化的比较 |
| 4.小结 |
| 实验二、针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器及设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 改良的大鼠自体血栓栓塞型模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 Western Blot检测 |
| 2.6 Real-time PCR检测 |
| 2.7 免疫荧光检测 |
| 2.8 统计学方法 |
| 2.9 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 各组大鼠RhoA蛋白和mRNA表达的比较 |
| 3.2 各组大鼠ROCK2蛋白和mRNA表达的比较 |
| 3.3 各组大鼠MLC蛋白表达的比较 |
| 3.4 各组大鼠MMP9蛋白表达的比较 |
| 3.5 各组大鼠ZO-1蛋白表达的比较 |
| 3.6 各组大鼠Claudin5蛋白表达的比较 |
| 3.7 各组大鼠Occludin蛋白表达的比较 |
| 4.小结 |
| 第三部分 临床研究 针刺提高脑梗死患者溶栓安全性的临床效应观察 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 中止标准 |
| 2.方法 |
| 2.1 样本量估算 |
| 2.2 病例分组 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 统计学处理 |
| 2.6 技术路线图 |
| 3.结果 |
| 3.1 基线比较 |
| 3.2 治疗后两组患者临床疗效比较 |
| 3.3 治疗前后NIHSS评分比较 |
| 3.4 治疗后sICH发生率比较 |
| 3.5 治疗后不良事件发生率比较 |
| 3.6 治疗前后sICH相关指标 |
| 3.7 依从性比较 |
| 4.小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 1.脑梗死模型及评价指标选择依据 |
| 1.1 脑梗死模型选择 |
| 1.2 脑梗死模型评价指标选择 |
| 2.溶栓时间的选择依据 |
| 3.sICH观察时机的选择 |
| 4.治疗手段选择的思考 |
| 4.1 针刺联合溶栓药物的选择依据 |
| 4.2 醒脑开窍针刺法选择依据 |
| 5.RhoA/ROCK信号通路与脑梗死rt-PA静脉溶栓安全性的关系 |
| 6.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的效应分析 |
| 7.针刺提高脑梗死模型大鼠溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制研究 |
| 8.针刺提高脑梗死患者溶栓安全性临床效应的分析 |
| 9.本研究的创新性 |
| 10.不足与展望 |
| 10.1 不足 |
| 10.2 展望 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 NIHSS评分量表 |
| 攻读博士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠TLR4/NF-κB通路的影响及证候研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 血脂异常合并缺血性脑卒中研究进展 |
| 1 血脂异常与缺血性脑卒中的流行病学现状 |
| 2 血脂异常引起动脉粥样硬化 |
| 3 血脂异常与脑卒中关系密切 |
| 4 缺血性脑卒中的调脂治疗 |
| 5 血脂异常合并缺血性脑卒中治疗中存在的问题 |
| 6 缺血性脑卒中与炎症反应 |
| 7 TLR4/NF-κB信号通路及炎症因子 |
| 8 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治血脂异常合并缺血性脑卒中的研究进展 |
| 1 中医药对血脂异常合并缺血性脑卒中的认识 |
| 2 中医药对血脂异常合并缺血性脑卒中的治疗 |
| 3 中医药在现代研究中发现的新作用 |
| 4 中医药针对疾病治疗难点发挥的作用 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠TLR4/NF-κB通路影响的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 药物与试剂 |
| 3 主要仪器 |
| 4 实验器械 |
| 5 动物饲养 |
| 6 实验方法 |
| 7 取材 |
| 8 观察与检测指标 |
| 9 统计方法 |
| 结果 |
| 1 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠体重的影响 |
| 2 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠血脂水平的影响 |
| 3 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠神经功能的影响 |
| 4 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠脑梗死体积的影响 |
| 5 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠p-NF-κB p65蛋白表达的影响 |
| 6 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠TLR4蛋白表达的影响 |
| 7 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠Lp-PLA2、TNF-α水平的影响 |
| 8 调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠hs-CRP、IL-6水平的影响 |
| 讨论 |
| 1 调脂通脉解毒方对脂质代谢的影响 |
| 2 调脂通脉解毒方对脑梗死体积的影响 |
| 3 调脂通脉解毒方对脑梗死后神经功能的影响 |
| 4 调脂通脉解毒方对TLR4/NF-κB信号通路相关炎症因子的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 血脂异常合并缺血性脑卒中患者不同证候间脑卒中分型及炎症因子水平特点研究 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 统计方法 |
| 结果 |
| 1 血脂异常合并缺血性脑卒中患者资料 |
| 2 各中医证候患者脑卒中病因分型(TOAST分型)特点 |
| 3 不同中医证候患者炎症因子差异比较 |
| 4 不同中医证候积分与炎症因子水平的相关性 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 血脂异常合并缺血性脑卒中患者中医证型与炎症因子的临床研究 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（3）针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 祖国医学对中风病的认识 |
| 1.1 中风病的病名沿革 |
| 1.2 中风病的病因病机 |
| 1.3 中风病的治疗方法 |
| 1.3.1 中药治疗 |
| 1.3.2 针灸治疗 |
| 2. 现代医学对脑梗死的认识 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 危险因素 |
| 2.3 发病机制 |
| 2.4 治疗方法 |
| 2.4.1 他汀类药物 |
| 2.4.2 神经保护剂 |
| 2.4.3 溶栓及血管内介入治疗 |
| 3. 本研究科学假说提出的理论依据 |
| 3.1 溶栓治疗的优势及时间窗的局限性 |
| 3.2 BBB损伤是脑梗死溶栓并发症的病理基础 |
| 3.2.1 BBB结构及功能 |
| 3.2.2 BBB损伤机制及溶栓并发症 |
| 3.3 抑制星形胶质细胞活化是减少脑梗死溶栓后BBB损伤的关键靶点 |
| 3.3.1 星形胶质细胞结构及功能 |
| 3.3.2 星形胶质细胞活化及BBB损伤 |
| 3.3.3 GFAP、AQP-4与星形胶质细胞密切相关 |
| 3.4 “针刺抑制星形胶质细胞活化提高脑梗死溶栓安全性”科学假说的提出 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪检测脑血流量 |
| 2.4 神经行为学评分方法 |
| 2.5 溶栓及针刺干预方法 |
| 2.6 脑梗死体积百分比的测定方法 |
| 2.7 BBB通透性的测定方法 |
| 2.8 脑含水量的测定方法 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 模型制备过程中脑血流变化 |
| 3.2 各组大鼠神经行为学评分比较 |
| 3.3 各组大鼠脑梗死体积百分比比较 |
| 3.4 各组大鼠BBB通透性比较 |
| 3.5 各组大鼠脑含水量比较 |
| 实验二 针刺提高脑梗死溶栓安全性的机制研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪检测脑血流量 |
| 2.4 神经行为学评分方法 |
| 2.5 溶栓及针刺干预方法 |
| 2.6 样本的获取与保存 |
| 2.7 Real-time PCR检测mRNA表达 |
| 2.8 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 各组大鼠GFAP的mRNA表达 |
| 3.2 各组大鼠AQP-4的mRNA表达 |
| 3.3 各组大鼠GFAP的蛋白表达 |
| 3.4 各组大鼠AQP-4的蛋白表达 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 自体血栓栓塞性模型的选择及评价 |
| 1.1 实验动物的选择 |
| 1.2 脑梗死模型的选择与评价 |
| 2. 干预方法的选择 |
| 2.1 针刺方法的选择 |
| 2.2 溶栓药物的选择 |
| 3. 星形胶质细胞相关指标的选择 |
| 4. 针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应分析 |
| 5. 针刺抑制星形胶质细胞活化提高脑梗死溶栓安全性的机制探讨 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）CT血管造影联合CT灌注成像在急性脑梗死侧支循环及溶栓疗效评价中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究的局限性及改进计划 |
| 小结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（5）基于调控自噬探讨火针改善脑梗死模型大鼠神经功能的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 火针疗法对MCAO模型大鼠神经功能恢复程度的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 造模结果 |
| 2.2 火针疗法对MCAO模型大鼠神经功能的影响 |
| 3 小结 |
| 实验二 火针疗法对MCAO模型大鼠脑梗死体积百分比的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验三 火针疗法对MCAO模型大鼠血管内皮细胞形态结构的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 血管内皮细胞微观形态 |
| 2.2 血管内皮细胞超微结构 |
| 3 小结 |
| 实验四 火针疗法对MCAO模型大鼠自噬发生的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 血管内皮细胞自噬观察结果 |
| 2.2 自噬发生蛋白表达结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 祖国医学对脑梗死的认识 |
| 2 火针干预与选穴依据 |
| 3 火针疗法改善MCAO模型大鼠神经功能缺损效果确切 |
| 4 火针疗法可对MCAO模型大鼠脑梗死体积百分比产生影响 |
| 5 火针疗法能够修复MCAO后大脑缺血半暗带血管内皮细胞形态结构 |
| 5.1 观测部位的选择及意义 |
| 5.2 火针疗法对VEC形态的修复 |
| 6 火针疗法对VEC的修复作用与调控自噬有关 |
| 6.1 脑梗死后自噬作用可减轻VEC损伤 |
| 6.2 火针疗法对自噬的调控作用是介导MCAO后 VEC损伤与修复的关键 |
| 7 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 针灸疗法治疗脑梗死的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、急性脑梗死概述 |
| 1、流行病学 |
| 2、病因及发病机制 |
| 3、溶栓疗法及局限性 |
| 二、血脑屏障破坏是脑梗死溶栓并发症的病理基础 |
| 1、血脑屏障结构 |
| 2、血脑屏障破坏与溶栓并发症 |
| 三、调控ERK1/2信号通路是治疗脑梗死的关键路径 |
| 1、ERK1/2信号通路 |
| 2、ERK1/2信号通路与脑梗死 |
| 四、中医对脑梗死的认识及针刺治疗概况 |
| 1、病名溯源 |
| 2、病因病机 |
| 3、古代针灸治疗 |
| 4、现代针灸治疗方法及机制 |
| 五、本研究科学假说 |
| 第二部分 针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应研究 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要仪器及设备 |
| 3. 主要试剂 |
| 二、方法 |
| 1. 动物分组 |
| 2. 改良的大鼠自体血栓栓塞性模型制备 |
| 3. 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 4. 神经行为学评分 |
| 5. 干预方法 |
| 6. 脑梗死体积测定 |
| 7. 脑含水量的测定 |
| 8. BBB通透性的测定 |
| 9. 溶栓后脑出血性转化的测定 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、结果与分析 |
| 1. 模型制备过程中的脑血流量变化 |
| 2. 各组大鼠神经行为学评分的比较 |
| 3. 各组大鼠脑梗死体积的比较 |
| 4. 各组大鼠脑出血性转化的比较 |
| 5. 各自大鼠BBB通透性的比较 |
| 6. 各组大鼠脑含水量的比较 |
| 四、本章小结 |
| 第三部分 针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的机制研究 |
| 一、材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要仪器及设备 |
| 3. 主要试剂 |
| 二、方法 |
| 1. 动物分组及干预方法 |
| 2. 侧脑室注射 |
| 3. 改良的大鼠自体血栓栓塞性模型制备 |
| 4. 激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 5. Western Blot检测 |
| 6. Real-time PCR检测 |
| 7. ELISA检测 |
| 8. 免疫荧光检测 |
| 9. 透射电镜观察血脑屏障超微结构 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、结果与分析 |
| 1. 各组大鼠BBB超微结构的改变 |
| 2. 针刺对脑梗死溶栓大鼠ERK1/2信号通路的作用 |
| 3. 各组大鼠MMP9的表达比较 |
| 4. 各组大鼠ZO-1的表达比较 |
| 5. 各组大鼠Claudin5的表达比较 |
| 6. 各组大鼠MAP-2的表达比较 |
| 7. 各组大鼠NF-κB p65的表达比较 |
| 8. 各组大鼠TNF-α和IL-1β的含量比较 |
| 9. ERK1/2信号通路对脑梗死溶栓大鼠MMP9表达的影响 |
| 10. ERK1/2信号通路对脑梗死溶栓大鼠NF-κB p65表达的影响 |
| 四、本章小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 一、动物模型的制备与评价 |
| 二、针刺方案选择 |
| 三、针灸延长脑梗死溶栓时间窗的效应探讨 |
| 四、针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗机制探讨 |
| 五、本研究的创新性 |
| 六、不足与展望 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（7）MiR-532-5p对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.1.4 实验动物和分组 |
| 2.1.5 实验细胞系 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 侧脑室注射 |
| 2.2.2 MCAO模型制作 |
| 2.2.3 神经功能缺损评分 |
| 2.2.4 TTC染色和梗死面积的测定 |
| 2.2.5 脑组织灌注固定及石蜡包埋 |
| 2.2.6 脑组织切片的制备 |
| 2.2.7 Nissl染色 |
| 2.2.8 细胞培养及计数 |
| 2.2.9 细胞转染及糖氧剥夺过程 |
| 2.2.10 TUNEL实验方法 |
| 2.2.11 RT-q PCR实验方法 |
| 2.2.12 Western blot方法 |
| 2.2.13 双荧光素酶检测实验 |
| 2.2.14 CCK-8检测 |
| 2.2.15 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠大脑中动脉缺血模型脑内mi R-532-5p及 PTEN的表达变化 |
| 3.2 MiR-532-5p减轻了小鼠脑卒中后的缺血性脑损伤 |
| 3.3 MiR-532-5p促进了小鼠大脑中动脉缺血模型脑内PI3K/Akt信号通路的激活 |
| 3.4 MiR-532-5p减轻了经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞的凋亡 |
| 3.5 MiR-532-5p促进了经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞PI3K/Akt信号通路的激活 |
| 3.6 PTEN被证实为mi R-532-5p的下游靶基因之一 |
| 3.7 过表达PTEN减弱了mi R-532-5p对经历糖氧剥夺后的小鼠脑神经瘤细胞的保护作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 自主跑轮预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 PI3K、STAT3信号通路介导了自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 脑部缺血预适应的诱发因素、机制及应用前景 |
| 参考文献 |
| 综述二 运动与学习和记忆能力关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（9）猴急性脑缺血模型的构建与超声成像评价（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 猴局部急性脑缺血模型的构建 |
| 导论 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器、耗材与试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 模型建立情况 |
| 2.2 影像学表现 |
| 2.3 病理学观察 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 超声在脑栓塞动物模型中的评价作用 |
| 导论 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器、耗材与试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 模型建立情况 |
| 2.2 影像学表现 |
| 2.3 病理学观察 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 超声超分辨成像技术在猴脑血管的应用初探 |
| 导论 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器、耗材与试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（10）头穴丛刺法对急性局灶性脑缺血大鼠Cdc42、GFAP蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 头穴丛刺法研究进展 |
| 1. 头针疗法理论依据 |
| 2. 头针疗法的历史沿革 |
| 3. 头针疗法的提出 |
| 4. 头穴丛刺法的分区及主治 |
| 5. 头穴丛刺法具体操作 |
| 6. 头穴丛刺法研究进展 |
| 7. 小结 |
| 综述二 急性缺血性脑卒中的西医治疗现状 |
| 1. 急性缺血性脑卒中的概况 |
| 2. 急性缺血性脑卒中的西医治疗 |
| 3. 预防并发症 |
| 4. 二级预防 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 实验材料及方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 针刺方法的选择——于氏头穴丛刺法 |
| 3.2 检测方法的选择——非标记的定量蛋白质组学技术 |
| 3.3 头穴丛刺法对MCAO大鼠神经功能评分影响 |
| 3.4 头穴丛刺法对MCAO大鼠脑组织Cdc42、GFAP蛋白表达的影响 |
| 4. 本实验的创新与不足 |
| 5. 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
四、急性大脑中动脉闭塞症局部溶栓疗法及脑缺血耐受时间的研究（论文参考文献）
- [1]针刺提高脑梗死溶栓安全性的RhoA/ROCK信号通路机制及临床效应观察[D]. 宋扬扬. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]调脂通脉解毒方对高脂血症合并脑梗死大鼠TLR4/NF-κB通路的影响及证候研究[D]. 李中康. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究[D]. 姜思媛. 南京中医药大学, 2021(01)
- [4]CT血管造影联合CT灌注成像在急性脑梗死侧支循环及溶栓疗效评价中的应用[D]. 刘影. 新乡医学院, 2020(12)
- [5]基于调控自噬探讨火针改善脑梗死模型大鼠神经功能的作用机制[D]. 栗亚楠. 天津中医药大学, 2020
- [6]针刺调控ERK1/2信号通路延长脑梗死溶栓时间窗的实验研究[D]. 张新昌. 南京中医药大学, 2020(01)
- [7]MiR-532-5p对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制研究[D]. 慕经纬. 中国医科大学, 2020(01)
- [8]预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究[D]. 叶宏. 昆明医科大学, 2019(05)
- [9]猴急性脑缺血模型的构建与超声成像评价[D]. 闫丽. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [10]头穴丛刺法对急性局灶性脑缺血大鼠Cdc42、GFAP蛋白表达的影响[D]. 武晓娜. 北京中医药大学, 2019(07)