一、干细胞因子的研究与应用（论文文献综述）
边帅[1]（2021）在《GNL3L在食管鳞癌进展中的作用及机制的研究》文中进行了进一步梳理背景:食管癌（Esophageal Cancer,EC）在全球癌症死亡率中排名第六,5年生存率不到20%,中位生存时间不足1年。基于流行病学和病理学研究,将食管癌分为食管鳞状细胞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC）和食管腺癌（Esophageal Adenocarcinoma,EAC）两种不同的类型。其中最常见的类型是食管鳞癌,约占发病总数的90%以上。尽管通过非侵入性筛查和内镜技术可早期发现病变并采取治疗措施,但仍有近半数食管癌患者确诊时已经发生转移或失去手术机会。食管癌对化疗敏感性差,现有分子靶向药物的应用也未能显着延长疾病晚期患者的生存时间。因此,特别有必要深入研究食管癌发生和进展的分子机制,不仅能够开发新的靶点用于药物研究,也能够为食管癌早期预警和预测患者预后提供新的标志物,从而更好地指导治疗和改善患者预后。鸟嘌呤核苷酸结合蛋白样3-样蛋白（Guanine Nucleotide-Binding Protein-Like3-Like,GNL3L）是一种新的、进化上保守的结合GTP的核仁蛋白,属于GTP酶HSR1-MMR1亚家族成员。近年来,GNL3L在细胞增殖和细胞凋亡中扮演的角色逐渐受到重视。现有文献已经在人类乳腺癌、子宫颈癌、肝细胞癌、胃腺癌、结直肠癌和脑胶质瘤细胞中探究了GNL3L在肿瘤发生和进展中扮演的角色。例如,在结直肠癌中,miR-4454的过表达抑制了GNL3L的产生,并通过NF-κB途径改善了肿瘤耐药性问题。然而关于GNL3L在食管鳞癌细胞中的作用和起作用的信号途径,还未见详细研究。因此,本研究旨在探究GNL3L在食管鳞癌组织中的表达,及其在食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡中的生物学功能,初步阐明其作用机理,为食管鳞癌的靶向治疗和疾病预测提供新的策略及相应理论依据。方法:（1）GNL3L在食管鳞癌中的差异表达及临床价值1)通过GEPIA数据库（Gene Expression Profiling Interactive Analysis）分析GNL3L在食管鳞癌组织及正常组织中表达水平和对患者预后的影响。2)通过Linked Omics进行相关性分析进一步确认GNL3L的临床价值;应用富集分析相关基因以预测可能的信号通路。（2）GNL3L在食管鳞癌进展中的生物学功能1)分别用GNL3L干扰RNA、GNL3L过表达质粒及阴性对照载体转染Eca-109和KYSE-150细胞,建立GNL3L敲低和过表达食管鳞癌细胞系。2)应用Western Blot实验确认细胞系建立成功后,分别在CCK8、克隆形成、细胞划痕、Transwell实验和流式细胞术中研究敲低和过表达GNL3L对食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。采用Western Blot实验检测敲低GNL3L对凋亡途经关键蛋白（Bcl-2,Bax和Caspase3-p17）表达水平的影响。3)采用人源性食管鳞癌裸鼠皮下肿瘤模型,分为阴性对照组（NC）、敲低组（GNL3L-KD）和过表达组（GNL3L-OE）。记录肿瘤大小和重量的变化情况。（3）探究GNL3L影响食管鳞癌进展的相关信号通路1)Western Blot检测RAS通路相关蛋白的表达变化。2)天然RAS信号通路抑制剂抗瘤酮A10处理过表达GNL3L的细胞,CCK8实验研究增殖的改变,流式细胞术研究凋亡的改变。（4）统计学方法本研究所有体外实验均独立重复3次,实验数据用Mean±SD表示,绘图及统计分析应用Graph Pad Prism 7软件,P值小于0.05被认为有统计学意义。结果:（1）GNL3L在人食管鳞癌组织中的差异表达及临床价值GNL3L在人食管鳞癌组织中高表达,较短的总生存期与GNL3L高水平表达有关,GNL3L表达水平还与肿瘤切除率和种族有关。GNL3L相关基因在肿瘤凋亡通路和RAS信号通路有丰富的表达。（2）GNL3L影响食管鳞癌的增殖、迁移、侵袭和凋亡敲低GNL3L对食管鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭有抑制作用;而过表达GNL3L具有促进作用。敲低细胞中的GNL3L促进凋亡,而过表达GNL3L抑制凋亡,这一作用是通过Bcl-2/Bax轴和Caspase级联反应实现的。在人源性食管鳞癌裸鼠皮下移植肿瘤模型中进一步证实,敲低GNL3L抑制肿瘤生长,过表达GNL3L产生促增殖作用。（3）GNL3L通过RAS通路影响食管鳞癌的生物学行为敲低和过表达GNL3L分别减少和增加RAS通路蛋白Ras和Raf的表达。用抗瘤酮A10处理过表达GNL3L的食管鳞癌细胞发现,GNL3L对细胞的促增殖作用和抗凋亡作用均被抑制。结论:本研究表明,GNL3L在食管鳞癌组织中异常高表达且与患者预后相关;GNL3L的表达水平影响食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抵抗凋亡;GNL3L的表达水平影响RAS通路蛋白的表达,天然RAS通路抑制剂抗瘤酮A10可抑制GNL3L的促增殖和抗凋亡作用,GNL3L可能通过RAS信号通路发挥生物学功能;通过人源性食管鳞癌裸鼠皮下移植肿瘤模型,进一步证实GNL3L具有促进肿瘤生长的作用。
梁璐,马涛,王斌,韩忠朝[2]（2020）在《间充质干细胞因子群对角膜损伤药效研究及临床初探》文中进行了进一步梳理间充质干细胞因子群是干细胞分泌的蛋白产物,具有促修复、调节免疫、抑制瘢痕产生等许多干细胞的生物学特性。试验应用干细胞因子对大鼠角膜化学烧伤进行治疗,结果表明干细胞因子可以促进角膜修复,缩短愈合时间,改善角膜透明度和水肿情况,同时抑制新生血管的过度生长。临床案例证明干细胞因子可以加速角膜损伤的愈合,使用简单、安全。
陈淑仪,陈胜锋,姚家威,阮慧敏,王丙云,陈志胜[3]（2020）在《犬间充质干细胞因子滴眼液的制备及对角膜损伤的修复作用》文中提出制备犬间充质干细胞因子滴眼液并评价其对角膜损伤的修复效果。利用犬脂肪间充质干细胞培养上清液、氯霉素、玻璃酸钠等制备犬间充质干细胞因子滴眼液,观察温度对其性状的影响;NaOH滤纸片法制备犬角膜化学性损伤模型,评价犬间充质干细胞因子滴眼液对角膜损伤的修复作用。犬间充质干细胞因子滴眼液在4℃存放30d性状未见明显改变,滴眼液可加快角膜损伤模型角膜上皮的修复,降低眼组织综合评分。本试验制备的犬间充质干细胞因子滴眼液可促进角膜损伤的修复。辅助修复犬眼角膜因物理因素、化学因素、生物因素而造成的损伤。
冯海鹏[4]（2019）在《AFP抑制GATA5功能后激活PI3K/AKT通路对肝癌细胞恶性行为的影响》文中研究指明目的:分析GATA5在肝癌HLE细胞系中干扰表达后和GATA5在肝癌HepG2细胞系过表达后对癌细胞生长、迁移、侵袭的恶性行为影响;分析GATA5对PI3K/AKT通路的调控、对癌基因Ras、Src的表达影响;分析GATA5对Beta-catenin通路的调控、癌干细胞因子C-myc、Sox2的表达影响;分析AFP对GATA5功能的影响。方法:1.构建cmv-GATA5慢病毒表达载体;pcDNA3.1-AFP、pTT5-PTEN表达载体;构建siRNA-GATA5、siRNA-AFP干扰表达载体。2.MTT检测GATA5对肝癌细胞HLE、HepG2增殖的影响。3.Transwell实验检测细胞迁移。4.细胞划痕实验检测细胞划痕修复能力。5.Western blot检测目的蛋白表达变化。6.免疫荧光实验,通过激光共聚焦显微镜观察目的蛋白表达及位置变化。结果:cmv-GATA5在HepG2细胞中表达GATA5,siRNA-GATA5干扰HLE细胞中的GATA5表达,pcDNA3.1-AFP在HLE细胞中表达AFP、siRNA-AFP干扰HepG2细胞中AFP的表达,pTT5-PTEN在HLE、HepG2细胞中表达PTEN。GATA5降低细胞的增殖率、抑制细胞迁移。GATA5抑制PI3K/AKT通路,抑制Ras、Src癌基因表达;GATA5抑制Beta-catenin通路,抑制干细胞因子Sox2、C-myc表达;AFP抑制GATA5功能后激活PI3K/AKT通路。结论:1.GATA5能够抑制肝癌细胞HLE、HepG2的增殖、迁移、划痕修复等恶性行为。2.GATA5能够抑制AKT通路,抑制癌基因Ras、Src表达;GATA5可能通过抑制Beta-catenin通路,抑制干细胞因子C-myc、Sox2的表达。3.AFP能够抑制GATA5功能激活PI3K/AKT通路。
管淑敏,孙丽丽[5]（2018）在《核干细胞因子在食管腺癌组织中的表达及其与临床特征的关系》文中研究指明目的探讨核干细胞因子在食管腺癌组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系。方法收集80例食管腺癌患者的病灶组织及相应的癌旁正常组织,采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（SABC）对食管腺癌组织与癌旁正常组织中的核干细胞因子进行检测,并分析核干细胞因子表达与食管腺癌患者临床特征的关系。结果核干细胞因子在食管腺癌组织、癌旁正常组织中的阳性表达率分别为75.0%、31.2%,差异有统计学意义（P﹤0.01）;核干细胞因子的阳性表达与食管腺癌患者的组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移情况有关（P﹤0.05）,但与食管腺癌患者的性别、年龄、TNM分期、肿瘤直径无关（P﹥0.05）。结论食管腺癌组织中核干细胞因子的表达异常,临床上可以将其作为测定食管腺癌的一种重要标志物。
侯费祎,谢兴文,李慎松,邵宏斌,张莲[6]（2017）在《麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在颅骨缺损大鼠体内迁移的影响》文中进行了进一步梳理背景:骨髓间充质干细胞是多向分化干细胞,在骨折愈合和中有着重要作用。如何促进其在体内迁移,进而促进骨缺损的修复,有着重要研究意义。目的:研究不同浓度麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在体内迁移的影响,探讨其促进骨折愈合的机制及其引经理论初探。方法:建立大鼠颅骨缺损的大鼠模型;贴壁筛选法提取干细胞,取第3代细胞,利用DAPI进行标记,然后尾静脉回植入颅骨缺损的大鼠体内。分别以0,42,84,168μL/kg麝香酮灌胃1次。结果与结论:与高剂量麝香酮组和空白组相比,低、中剂量麝香酮组骨缺损部分的骨髓间充质干细胞数量增加,干细胞因子和Fractalkine的表达水平明显增加。提示中低剂量麝香酮具有促进外源性干细胞在体内的迁移作用。
黄洁芳,徐浣白,张雁云[7]（2016）在《干细胞因子治疗——研究与展望》文中指出干细胞是一类具有自我更新能力的多潜能细胞,在一定的条件下,可分化为多种功能细胞。而干细胞因子是指可靶向调控干细胞的干性维持、定向分化等特性的重要因子,以及在干细胞治疗中产生的、对其修复损伤具有关键作用的活性因子。近年来,干细胞逐渐被应用到各种人类疾病的治疗中,但其临床应用仍然受到多种因素的制约。干细胞因子治疗为解决及避免这些问题带来了曙光,有望成为未来干细胞治疗的新方向。
胡梦竹[8]（2016）在《RNA干扰SHEEC细胞中Nucleostemin基因对PI3K/AKT/mTOR通路相关因子的影响》文中研究指明目的检测人永生化食管上皮细胞（Shantou Human Embryonic Esophageal Epithelial cell line,SHEE）及其恶变细胞（Shantou Human Embryonic Esophageal Carcinoma Epithelial cell line,SHEEC）中核干细胞因子（Nucleostemin,NS）和磷脂肌醇3‐激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphninositide 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/AKT/mTOR）信号转导通路中关键因子PI3K、AKT、mTOR的表达水平。然后利用RNA干扰（RNAi）技术沉默癌细胞SHEEC中NS基因的表达,探讨NS基因下调后对PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中相关分子表达的影响,检测抑制NS基因后对SHEEC细胞凋亡和增殖的影响,初步探索NS基因在食管癌发生发展过程中的作用及其对PI3K/AKT/mTOR信号转导通路的影响。方法1.SHEE和SHEEC细胞连续传代培养,取对数生长期细胞,分别提取RNA和蛋白,然后采用Real-time PCR和Western Blot方法检测SHEE及SHEEC细胞中NS基因和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中关键因子PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白的表达水平。2.利用RNAi技术沉默SHEEC细胞中NS基因的表达,用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染6h后的转染效率,RT-PCR检测转染24h后NS基因的表达水平并计算其抑制率。3.转染24h和48h以后,分别用RT-PCR和Western Blot方法检测SHEEC细胞中NS表达下调后PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键因子mRNA和蛋白水平的表达变化。4.流式细胞仪和MTT方法分别检测干扰NS基因前后SHEEC细胞凋亡率和增殖活性的变化。5.采用SPSS 21.0统计软件中的t检验和方差分析对实验结果进行分析,数据用X±S表示,检验水准为α=0.05。结果1.癌细胞SHEEC中NS、PI3K、AKT、mTOR和GβL mRNA的表达量均显着高于正常细胞SHEE,分别为SHEE细胞的2.047±0.507、2.13±0.262、1.614±0.256、2.072±0.746和2.00±0.432倍,差异有统计学意义（P<0.05）;NS、PI3K和p-AKT蛋白在SHEEC细胞中的表达也显着高于SHEE细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。2.转染细胞6h后,荧光显微镜下观察到NS-RNAi成功转染至SHEEC细胞中,流式细胞仪检测转染效率为87.18%,RT-PCR检测NS基因在SHEEC细胞中的表达水平明显下调,NS的抑制率约为47.8%。3.RT-PCR结果显示,抑制SHEEC细胞中NS基因的表达后PI3K、AKT、mTOR和GβL mRNA的表达均明显下降,NS-RNAi组与SHEEC组、NC组和MOCK组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;Western Blot结果显示,抑制SHEEC细胞中NS基因的表达后PI3K和p-AKT基因的蛋白表达量为0.353±0.361和0.312±0068,与SHEEC组、NC组和MOCK组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。4.NS-RNAi组细胞凋亡率显着高于SHEEC组、Mock组和NC组（35.487±1.631 vs.0.227±0.114、6.683±0.486、11.580±2.24,P<0.05）;NS-RNAi组与SHEEC组、Mock组、NC组和GAPDH组比较,细胞增殖能力显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.NS和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中关键因子在SHEEC细胞中高表达,在SHEE细胞中低表达。2.抑制SHEEC细胞中NS基因的表达后NS与PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中关键因子的表达均明显下降,PI3K/AKT/mTOR信号通路可能是NS发挥作用的一种非依赖p53作用的信号途径。3.抑制NS基因的表达可以明显降低SHEEC细胞增殖能力,促进细胞的凋亡,表明NS可能与肿瘤细胞的恶性增殖和凋亡逃逸密切相关。
万鹏[9]（2015）在《黑木耳黑色素对贫血小鼠肠道微生态的调节》文中认为缺铁性贫血（Iron Deficiency Anemia,IDA）是由于各种不同原因引起体内储存的铁缺乏进而导致的,治疗缺铁性贫血的方法多为采用补铁剂。然而,补铁剂会引起恶心、腹痛、腹泻或便秘等副作用,对胃肠健康危害较大,且改善贫血的效果有限,易复发,亟需寻求一种安全高效副作用低的抗贫血物质。本课题组前期研究发现,黑木耳黑色素具有明显改善缺铁性贫血的作用,为使该产品投入市场造福社会,其作用机制及其对肠道微生态的影响需要进一步深入研究验证。本文以黑木耳为原料,采用酸解碱溶酸沉再纯化的方法制备得到黑木耳黑色素,并通过建立缺铁性贫血小鼠模型对黑木耳黑色素改善缺铁性贫血、调节肠道微生态的作用进行了研究,取得如下研究结果:（1）IDA+M组小鼠血红蛋白和红细胞数显着高于IDA组和IDA+Fe2+（p<0.05）,血红蛋白浓度分别为171.67±7.53 g/L,85.00±15.17 g/L和156.67±8.16g/L;红细胞数分别为11.38±1.37 1012/L,8.15±0.74 1012/L和10.88±0.92 1012/L;IDA+M组血清干细胞因子（SCF）浓度为904.01±53.30 pg/mL、血清促红细胞生成素（EPO）浓度为182.28±17.70pg/mL、血清特异转录因子GATA-1浓度为13.00±0.70ng/mL、血清铁（SI）浓度为1.44±0.06μmol/dL,均显着高于IDA和IDA+Fe2+组（p<0.05）,其二者以上指标分别为血清干细胞因子（SCF）827.31±64.84pg/mL、610.48±98.13 pg/mL,血清促红细胞生成素（EPO）137.62±11.62 pg/mL、154.65±11.38 pg/mL,血清特异转录因子GATA-1 10.72±1.02 ng/mL、10.66±1.62ng/mL,血清铁（SI）0.75±0.04μmol/dL、1.09±0.07μmol/dL,所检测的各项血液指标中,灌胃黑木耳黑色素组均优于灌胃硫酸亚铁组小鼠,存在统计学上的显着差异（p<0.05）,说明黑木耳黑色素可以有效改善缺铁性贫血症状,并具有促进机体对铁的吸收及造血功能。（2）黑木耳黑色素可以提高IDA小鼠肠道微生物群落丰度下降的S24-7＿norank,Alistipes,Ruminococcaceae＿uncultured,Blautia,Ruminococcaceae＿unclassified,Prevotellaceae＿uncultured等6个主要种属细菌群落的丰度,提高值为0.01%～3.87%;使得缺铁性贫血小鼠肠道内丰度升高的Allobaculum和Parabacteroides的丰度值分别降低21.12%和3.51%。黑木耳黑色素可以提高缺铁性贫血小鼠肠道微生物群落的丰度、均匀度和多样性指数,效果优于硫酸亚铁,Control+M组,Control组,Control+Fe2+组,IDA+M组,IDA+Fe2+组,IDA组各组小鼠肠道菌群的丰度指数分别为:3.27,3.07,3.02,3.01,2.88,2.61,均匀度指数分别为:0.578,0.564,0.505,0.502,0.430,0.410,多样性指数分别为:0.866,0.848,0.823,0.827,0.634,0.586。这说明黑木耳黑色素能够使得缺铁性贫血小鼠肠道菌群的异常变化得到恢复,缩小其与正常小鼠肠道菌群组成的差异,使其肠道菌群的构成趋于正常状态。（3）IDA+M组小鼠肠道内有益物质丙酸、丁酸等短链脂肪酸类代谢物显着高于IDA组及IDA+Fe2+组（p<0.05）,丙酸浓度分别为5.21±0.96 mg/mL、2.61±0.53mg/mL、2.07±0.50 mg/mL,丁酸浓度分别为4.27±0.91 mg/mL、1.04±0.35 mg/mL、1.36±0.57 mg/mL;同时肠道代谢物中软脂酸、硬脂酸、油酸、氨基酸总量也得到显着提高（p<0.05）,软脂酸浓度分别为1.56±0.17 mg/mL,1.22±0.13 mg/mL,1.09±0.12 mg/mL;硬脂酸的浓度分别为1.34±0.15 mg/mL,1.19±0.13 mg/mL,0.92±0.10 mg/mL;油酸浓度分别为0.46±0.04 mg/mL,0.23±0.03 mg/mL,0.34±0.04mg/mL;氨基酸总量分别为23.91±2.31 mg/mL,17.00±3.42 mg/mL,22.56±1.71mg/mL。这说明黑木耳黑色素可以提高缺铁性贫血小鼠肠道内代谢物的浓度,缩小与正常小鼠间的差距,使得肠道代谢趋近于正常水平。
韩崇旭,孙艳,许文荣,张锡然[10]（2015）在《针对核干细胞因子腺病毒干扰载体构建与干扰作用观察》文中研究说明目的构建针对核干细胞因子（Nucleostemin）基因寂寞的RNA干扰腺病毒载体,观察其干扰作用。方法根据克隆的全长Nucleostemin基因（1 650bp,GenBank接受序号:AY825265）设计RNA干扰反向重复序列,采用分子生物学组装腺病毒载体,制备高效价RNAi重组腺病毒。实验分为Backbone-P1P2重组腺病毒感染组（P1P2干扰组）、Backbone-P3P4重组腺病毒感染组（P3P4干扰组）、Backbone空质粒病毒感染对照组（B组）和无病毒感染对照组。不同剂量腺病毒液RNAi（分别为60、30、15和7.5μL）转染F6细胞及U937细胞,采用蛋白质印迹法检测F6细胞及U937细胞中核干细胞因子的蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测U937细胞中核干细胞因子的mRNA表达水平。计数法绘制细胞生长曲线,判定细胞活力;流式细胞术检测细胞周期变化。结果靶向核干细胞因子基因的腺病毒RNA干扰载体（Backbone-P1P2,Backbone-P3P4）被成功构建。蛋白质印迹法检测结果显示,F6细胞内不同梯度浓度腺病毒RNA干扰后,核干细胞因子表达量分别为1.23、4.48、5.03和5.75,随P3P4片段RNA干扰浓度梯度下降而核干细胞因子表达量呈上升趋势。P1P2干扰组蛋白水平为0.219±0.051,与空质粒转染对照组的2.174±0.196比较明显降低,F=279.4,P<0.001;P3P4干扰组蛋白水平为0.0164±0.003,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=363.4,P<0.001。P1P2干扰组基因表达水平为1.585±0.20,与空质粒转染对照组的3.932±0.271比较明显降低,F=145.9,P<0.001;P3P4干扰组基因表达水平为1.328±0.251,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=149.9,P<0.001。细胞周期实验发现,核干细胞因子干扰后,P1P2腺病毒RNA干扰组为44.89±4.04,与空质粒转染对照组的54.74±3.28对比减低,F=10.75,P=0.031;P3P4干扰组为45.00±3.82,与空质粒转染对照组对比减低,F=11.23,P=0.029;S期+G2M期细胞P1P2干扰组为55.11±2.81,与空质粒转染对照组的45.26±1.72对比升高,F=26.82,P=0.007;P3P4干扰组为55.00±2.64,与空质粒转染对照组相比明显升高,F=28.67,P=0.006。表明核干细胞因子在细胞周期中阻碍G2/M检验点通过。结论成功构建针对核干细胞因子基因沉默的RNA干扰腺病毒载体,该病毒载体可特异有效的沉默下调核干细胞因子基因的表达,为今后研究核干细胞因子功能奠定了基础。
二、干细胞因子的研究与应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞因子的研究与应用（论文提纲范文）
（1）GNL3L在食管鳞癌进展中的作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 食管癌概述 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 食管癌的分子靶向治疗 |
| 1.2 核仁的功能 |
| 1.2.1 核仁的结构及主要功能 |
| 1.2.2 核仁内蛋白的定位 |
| 1.2.3 核仁的其他功能 |
| 1.3 核干细胞因子家族 |
| 1.3.1 核干细胞因子家族概述 |
| 1.3.2 核干细胞因子功能概述 |
| 1.3.3 结合核干细胞因子的蛋白及相关作用机制 |
| 1.3.4 GNL3L与核干细胞因子的联系及区别 |
| 1.4 RAS信号通路与食管癌 |
| 1.4.1 RAS信号通路概述 |
| 1.4.2 RAS信号通路与肿瘤 |
| 1.4.3 RAS信号通路与食管癌 |
| 1.5 抗瘤酮与肿瘤治疗 |
| 1.5.1 抗瘤酮概述 |
| 1.5.2 抗瘤酮作用于RAS通路 |
| 1.5.3 抗瘤酮对多种肿瘤有效 |
| 1.6 小结 |
| 第2章 综述 GNL3L的研究进展 |
| 2.1 GNL3L的发现及基本结构 |
| 2.2 GNL3L的空间构型与细胞内定位 |
| 2.3 GNL3L在调节细胞周期中的作用 |
| 2.4 GNL3L影响核糖体合成 |
| 2.5 GNL3L在肿瘤中的作用 |
| 2.5.1 结合雌激素相关受体γ |
| 2.5.2 结合小鼠双微体2 |
| 2.5.3 结合核因子κB |
| 2.5.4 影响肿瘤起始细胞 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验细胞系及动物 |
| 3.1.2 抗体、siRNA及质粒 |
| 3.1.3 主要实验试剂及仪器 |
| 3.1.4 主要实验溶液配制 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 细胞转染 |
| 3.2.3 CCK8 实验 |
| 3.2.4 Transwell迁移/侵袭实验 |
| 3.2.5 克隆形成实验 |
| 3.2.6 细胞划痕实验 |
| 3.2.7 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 3.2.8 Western Blot实验 |
| 3.2.9 人源性食管鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型 |
| 3.2.10 统计学分析 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 GNL3L在食管鳞癌组织中的表达及临床价值 |
| 4.2 GNL3L敲低和过表达的食管鳞癌细胞系的建立 |
| 4.3 GNL3L影响食管鳞癌细胞的增殖 |
| 4.4 GNL3L影响食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 |
| 4.5 GNL3L影响食管鳞癌细胞的凋亡 |
| 4.6 GNL3L影响RAS通路相关蛋白的表达 |
| 4.7 阻断RAS信号通路抑制GNL3L的促增殖作用 |
| 4.8 阻断RAS信号通路抑制GNL3L的抗凋亡作用 |
| 4.9 GNL3L对人源性食管鳞癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 GNL3L在食管鳞癌组织中的差异表达及临床价值 |
| 5.2 GNL3L影响食管鳞癌细胞的增殖 |
| 5.3 GNL3L影响食管鳞癌细胞的迁移和侵袭 |
| 5.4 GNL3L影响食管鳞癌细胞的凋亡 |
| 5.5 GNL3L通过RAS通路影响食管鳞癌的生物学行为 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）间充质干细胞因子群对角膜损伤药效研究及临床初探（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 试验分组 |
| 1.4 角膜碱烧伤模型制备 |
| 1.5 动物分组及给药治疗 |
| 1.6 观察指标 |
| 1.6.1 角膜形态学变化 |
| 1.6.2 角膜透明度、水肿程度检查 |
| 1.6.3 角膜新生血管（CNV）长度及面积的测量 |
| 1.7 统计学方法 |
| 1.8 临床疗效观察 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 角膜形态学修复观察 |
| 2.2 角膜新生血管观察 |
| 2.3 干细胞因子在宠物眼科临床治疗观察 |
| 3 讨论 |
| 4 结束语 |
（3）犬间充质干细胞因子滴眼液的制备及对角膜损伤的修复作用（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬间充质干细胞因子滴眼液的制备 |
| 2.2 温度对犬间充质干细胞因子滴眼液的影响 |
| 2.3 犬间充质干细胞滴眼液对角膜损伤的修复作用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 温度对犬间充质干细胞因子滴眼液的影响 |
| 3.2 犬间充质干细胞滴眼液对角膜损伤的修复作用 |
| 4 讨论 |
（4）AFP抑制GATA5功能后激活PI3K/AKT通路对肝癌细胞恶性行为的影响（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 实验试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 培养细胞 |
| 2.2 瞬时表达载体的构建及表达 |
| 2.3 建立稳定表达细胞株 |
| 2.4 Western Blot |
| 2.5 MTT比色法 |
| 2.6 细胞划痕实验 |
| 2.7 Transwell实验 |
| 2.8 免疫荧光实验 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 GATA5 在人肝癌HepG2 细胞中表达和HLE细胞中干扰表 |
| 3.2 GATA5 抑制细胞增殖率 |
| 3.3 GATA5 抑制细胞迁移 |
| 3.4 GATA5 延缓细胞划痕修复能力 |
| 3.5 GATA5 抑制PI3K/AKT通路和Ras、Src表达 |
| 3.6 GATA5 抑制Beta-catenin通路和C-myc、Sox2 表达 |
| 3.7 GATA5 通过激活PTEN表达抑制PI3K/AKT通路 |
| 3.8 AFP抑制GATA5 功能后激活PI3K/AKT通路 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肝癌发生过程中甲胎蛋白的生物学功能 |
| 参考文献 |
| 附录 作者简历 |
| 致谢 |
（6）麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在颅骨缺损大鼠体内迁移的影响（论文提纲范文）
| 文章快速阅读: |
| 文题释义: |
| 麝香酮: |
| 细胞标记: |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 动物: |
| 药物: |
| 主要试剂及仪器: |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 细胞培养 |
| 1.4.2 骨髓间充质干细胞鉴定 |
| 成脂诱导: |
| 成骨诱导: |
| 细胞表型鉴定: |
| 1.4.3 细胞标记 |
| 1.4.4 MTT检测 |
| 1.4.5 颅骨骨缺损模型的建立 |
| 1.4.6 细胞移植 |
| 1.4.7 药物干预 |
| 1.4.8 免疫组化检测 |
| 1.4.9 迁移细胞观察 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 培养骨髓间充质干细胞的形态 |
| 2.2 骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 2.3 细胞标记效果 |
| 2.4 麝香酮对骨髓间充质干细胞迁移的影响 |
| 2.5 麝香酮对骨髓间充质干细胞因子和Fractalkine表达的影响 |
| 3 讨论Discussion |
（7）干细胞因子治疗——研究与展望（论文提纲范文）
| 1 干细胞治疗中干细胞因子对干细胞的靶向调控 |
| 1.1 干细胞因子对干细胞特性的影响 |
| 1.2 干细胞因子与干细胞的跨胚层分化 |
| 1.3 干细胞因子与肿瘤干细胞 |
| 2 干细胞因子在疾病治疗中的作用 |
| 2.1 干细胞因子的组织修复作用 |
| 2.2 干细胞因子与免疫调控 |
| 3 结语与展望 |
（8）RNA干扰SHEEC细胞中Nucleostemin基因对PI3K/AKT/mTOR通路相关因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验流程图 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 RT-PCR检测SHEE及SHEEC细胞中NS、PI3K、AKT和mTOR mRNA的表达 |
| 2.2.4 Western Blot检测SHEE及SHEEC细胞中NS、PI3K和AKT基因的蛋白表达情况 |
| 2.2.5 细胞转染 |
| 2.2.6 流式细胞仪检测干扰NS基因前后各组细胞的凋亡率 |
| 2.2.7 MTT法检测干扰NS后细胞增殖活性 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 RT-PCR检测SHEE和SHEEC细胞中NS、PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达水平 |
| 3.1.1 RNA纯度和完整性检测结果 |
| 3.1.2 Real-Time PCR结果 |
| 3.2 Western Blot检测SHEE和SHEEC细胞中NS、PI3K和p-AKT蛋白的表达水平 |
| 3.2.1 BCA法检测蛋白浓度 |
| 3.2.2 SHEE和SHEEC细胞中NS、PI3K及p-AKT蛋白的表达水平 |
| 3.3 抑制SHEEC细胞中NS基因后对PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中相关因子的影响 |
| 3.3.1 细胞转染后荧光显微镜下观察结果 |
| 3.3.2 流式细胞仪检测转染效率 |
| 3.3.3 RT-PCR检测干扰效果 |
| 3.3.4 干扰SHEEC细胞中NS表达后PI3K、AKT、mTOR和GβL mRNA的表达 |
| 3.3.5 干扰SHEEC细胞中NS表达后PI3K和p-AKT蛋白的表达 |
| 3.3.6 细胞凋亡率检测 |
| 3.3.7 MTT检测抑制SHEEC细胞中NS基因表达后对细胞增殖的影响 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 NS在SHEEC细胞中的表达及意义 |
| 4.2 PI3K/AKT/mTOR信号转导通路相关分子在SHEEC细胞中的表达及意义 |
| 4.3 NS表达下调对PI3K/AKT/mTOR的影响 |
| 4.4 NS表达下调对细胞凋亡的影响 |
| 4.5 NS表达下调对细胞增殖的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 核干细胞因子的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 1.基本信息 |
| 2.硕士期间发表的论文 |
| 3.参加的研究项目 |
| 致谢 |
（9）黑木耳黑色素对贫血小鼠肠道微生态的调节（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 专业词汇与缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 缺铁性贫血概况及研究进展 |
| 1.1.1 缺铁性贫血的概况 |
| 1.1.2 缺铁性贫血的研究进展 |
| 1.2 肠道微生态的概况及研究进展 |
| 1.2.1 肠道微生态的概况 |
| 1.2.2 缺铁性贫血与肠道微生态的相关性研究进展 |
| 1.3 黑色食品和黑木耳黑色素的研究进展 |
| 1.3.1 黑色食品的研究进展 |
| 1.3.2 黑木耳黑色素的研究进展 |
| 1.4 本课题的立题背景与研究内容 |
| 第2章 黑木耳黑色素的制备与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 黑木耳黑色素的制备 |
| 2.3.2 黑木耳黑色素中铁元素含量测定 |
| 2.3.3 黑木耳黑色素的鉴定 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 黑木耳黑色素的铁含量 |
| 2.4.2 黑木耳黑色素的紫外可见光谱特征 |
| 2.4.3 黑木耳黑色素的红外光谱特征 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 黑木耳黑色素对小鼠缺铁性贫血的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 实验试剂 |
| 3.2.4 实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 低铁饲料的配制 |
| 3.3.2 缺铁性贫血小鼠模型造模方法 |
| 3.3.3 动物分组与实验 |
| 3.3.4 小鼠外周血常规分析 |
| 3.3.5 小鼠造血功能指标分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 小鼠缺铁性贫血模型的建立 |
| 3.4.2 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠体重的影响 |
| 3.4.3 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠外周血液常规的影响 |
| 3.4.4 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠造血功能的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 黑木耳黑色素对贫血小鼠肠道菌群的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 粪便样品的收集与处理 |
| 4.3.2 粪便总DNA提取及检测 |
| 4.3.3 粪便总DNA的 ERIC-PCR扩增 |
| 4.3.4 小鼠肠道菌群高通量测序 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 粪便总DNA提取及纯度检测结果 |
| 4.4.2 粪便总DNA的 ERIC-PCR扩增结果及分析 |
| 4.4.3 小鼠肠道菌群高通量测序多样性分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 黑木耳黑色素对贫血小鼠肠道代谢物的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料和仪器 |
| 5.2.1 试剂 |
| 5.2.2 仪器 |
| 5.2.3 实验动物 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 粪便样本的采集 |
| 5.3.2 粪便样品前处理 |
| 5.3.3 GC-MS分析方法 |
| 5.3.4 肠道代谢物物质鉴定及数据处理 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 缺铁性贫血小鼠肠道代谢物组成物质鉴定 |
| 5.4.2 缺铁性贫血小鼠肠道代谢相关物质的变化 |
| 5.4.3 缺铁性贫血小鼠主要肠道菌群与肠道代谢物相关性分析 |
| 5.4.4 各组小鼠肠道代谢物总体差异性分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 讨论 |
| 6.1 黑木耳黑色素对小鼠缺铁性贫血的改善作用 |
| 6.1.1 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠临床症状的影响 |
| 6.1.2 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠造血因子影响 |
| 6.1.3 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠铁吸收的影响 |
| 6.2 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠肠道健康的影响 |
| 6.2.1 黑木耳黑色素对小鼠肠道菌群微生物群落组成的影响 |
| 6.2.2 黑木耳黑色素对缺铁性贫血小鼠肠道代谢物的调节作用 |
| 6.2.3 肠道菌群与肠道代谢物间的关联性 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论与创新点 |
| 7.1.1 结论 |
| 7.1.2 创新点 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
| 致谢 |
（10）针对核干细胞因子腺病毒干扰载体构建与干扰作用观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 多聚核苷酸序列设计 |
| 1.3 蛋白质印迹法检测转染后靶细胞中核干细胞因子表达水平 |
| 1.4实时定量PCR检测 |
| 1.5 细胞生长曲线检测 |
| 1.6 细胞周期检测 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 穿梭质粒构建 |
| 2.2 结果测序 |
| 2.3 重组腺病毒质粒构建 |
| 2.4 瞬时转染293A 包装腺病毒的制备与鉴定 |
| 2.5 感染后靶细胞中核干细胞因子的表达 |
| 2.6 感染后 U937靶细胞中核干细胞因子基因的表达水平 |
| 2.7 生长曲线变化 |
| 2.8 细胞周期变化 |
| 3 讨论 |
四、干细胞因子的研究与应用（论文参考文献）
- [1]GNL3L在食管鳞癌进展中的作用及机制的研究[D]. 边帅. 吉林大学, 2021(01)
- [2]间充质干细胞因子群对角膜损伤药效研究及临床初探[J]. 梁璐,马涛,王斌,韩忠朝. 中国动物保健, 2020(04)
- [3]犬间充质干细胞因子滴眼液的制备及对角膜损伤的修复作用[J]. 陈淑仪,陈胜锋,姚家威,阮慧敏,王丙云,陈志胜. 畜牧兽医杂志, 2020(02)
- [4]AFP抑制GATA5功能后激活PI3K/AKT通路对肝癌细胞恶性行为的影响[D]. 冯海鹏. 海南医学院, 2019(02)
- [5]核干细胞因子在食管腺癌组织中的表达及其与临床特征的关系[J]. 管淑敏,孙丽丽. 癌症进展, 2018(06)
- [6]麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在颅骨缺损大鼠体内迁移的影响[J]. 侯费祎,谢兴文,李慎松,邵宏斌,张莲. 中国组织工程研究, 2017(13)
- [7]干细胞因子治疗——研究与展望[J]. 黄洁芳,徐浣白,张雁云. 现代免疫学, 2016(05)
- [8]RNA干扰SHEEC细胞中Nucleostemin基因对PI3K/AKT/mTOR通路相关因子的影响[D]. 胡梦竹. 郑州大学, 2016(02)
- [9]黑木耳黑色素对贫血小鼠肠道微生态的调节[D]. 万鹏. 黑龙江大学, 2015(12)
- [10]针对核干细胞因子腺病毒干扰载体构建与干扰作用观察[J]. 韩崇旭,孙艳,许文荣,张锡然. 中华肿瘤防治杂志, 2015(08)