一、碱性成纤维细胞生长因子上调原代培养鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达(英文)（论文文献综述）
杜欣[1]（2021）在《牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究》文中研究指明目的:观察牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用,阐明牛黄及其有效成分治疗缺血性中风的内在生物学机制。方法:1.体外脑神经血管单元模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立（1）利用体外原代细胞培养技术,提取大脑皮质神经元、星形胶质细胞和微血管内皮细胞,进行细胞鉴定;（2）利用transwell板将三种细胞共培养,构建体外脑神经血管单元的模型,利用TEER值,判定模型是否成功;（3）采用缺氧1h,复氧24h,构建OGD/R模型,利用TEER值、荧光素钠渗透系数判定模型是否成功。2.牛黄及其有效成分对三种细胞的毒性利用不同浓度的牛黄（Bezoar）、牛磺酸（Taurine）、牛黄熊去氧胆酸（TUDCA）和熊去氧胆酸（UDCA）,作用于神经元、星形胶质细胞和内皮细胞,分别干预24h和48 h,利用CCK8检测细胞活力,检测每种不同浓度的药物对细胞的毒性。3.牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用（1）通过OGD/R模型,检测牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA的不同剂量对细胞的作用,利用CCK8法检测细胞活力,确定每种药物的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。（3）牛黄对脑神经血管单元的保护机制研究加入抑制剂LY294002,检测牛黄对细胞的干预是通过PI3K/AKT通路实现的;检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT、p-AKT。4.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）利用OGD/R模型,筛选牛磺酸+牛磺熊去氧胆酸（T+T）,牛磺酸+熊去氧胆酸（T+U）的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。5.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+U的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶 MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 NF-κBp65,p-P65,IKBα,p-IKBα 蛋白表达。6.配伍组分牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+T的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5,CA43、AQP4以及 P38MAPK,P-P38MAPK。结果1.获得了纯度较高的神经元、星形胶质细胞和内皮细胞（1）神经元培养7d后成熟,经MAP2免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（2）星形胶质细胞培养7d后成熟,经GFAP免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（3）内皮细胞培养7d后成熟,经Ⅷ因子免疫荧光鉴定,纯度大于95%。2.利用transwell,建立了脑神经血管单元的模型（1）该模型的电阻值在3-5天趋于平稳;（2）三细胞共培养,三种细胞的状态和单细胞相比,更佳。3.成功复制OGD/R模型利用缺氧1h,复氧24h,能够成功复制OGD/R模型,和正常组相比,模型组电阻值降低,荧光素钠渗透系数升高,能够进行下一步的实验研究。4.筛选药物毒性利用不用浓度的牛黄、牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸分别干预24h和48h,筛选药物的毒性。5.筛选药物的保护剂量利用无毒性的各种药物浓度,通过OGD/R造模方法,检测细胞活力,筛选出保护作用的最佳剂量。6.牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用（1）牛黄及其有效成分降低LDH,升高γ-GT,提高TEER值和降低荧光素钠渗透系数;（2）牛黄及其有效成分减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1 β的水平;（3）牛黄及其有效成分降低NO、MDA的水平,升高SOD的水平;（3）牛黄及其有效成分抑制神经元的凋亡;（4）牛黄降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（5）牛黄能升高紧密连接蛋白的表达,提高ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达;（6）牛黄通过HIF-α/VEGF,PI3K/AKT通路,发挥保护NVU的作用,牛黄降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,升高PI3K、AKT的蛋白表达水平。7.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）筛选了配伍组分的最佳剂量,T+T的最佳剂量1mM Taurine和1μM TUDCA,T+U的最佳剂量1mM Taurine和1μM UDCA;（2）T+T、T+U有效保护血脑屏障,降低TEER值,降低荧光素钠渗透系数,升高γ-GT;（3）T+T、T+U有效减轻细胞损伤,降低LDH的水平;（4）T+T、T+U有效减轻炎症反正,降低TNF-α、IL-6、IL-1β的值;（5）T+T、T+U有效抑制氧化反应,降低NO、MDA的水平,升高SOD的活力;（6）T+T、T+U抑制神经元的凋亡率。8.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+U抑制神经元的凋亡率;（2）T+U 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+U降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+U降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低MyD88、P-P65、P-IKB α的蛋白表达,通过MyD88/NF-κB信号通路发挥脑保护作用。9.配伍组分牛磺酸和牛黄熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+T抑制神经元的凋亡率;（2）T+T 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+T降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+T降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低AQP4、P38MAPK,升高CX43的蛋白表达。结论（1）牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA能够减轻炎症反应,降低氧化应激的水平,抑制神经元的凋亡发挥神经保护的作用;（2）牛黄通过HIF-1α/VEGF和PI3K/AKT通路发挥脑保护作用;（3）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸,牛磺酸和熊去氧胆酸配伍,发挥协同作用,比单独使用牛磺酸药效更好;（4）牛磺酸和熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激的水平,保护血脑屏障,抑制神经元的凋亡,能够抑制通路MyD88/NF-κB通路发挥脑保护作用（5）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激,保护血脑屏障,能够抑制P38MAPK通路,发挥脑保护作用;
黎晓慧[2]（2020）在《树鼩原代BMECs和AS的分离培养及ZIKV感染特性的初步研究》文中提出ZIKV（Zika virus,ZIKV）属于黄病毒科黄病毒属,ZIKV感染与中枢神经系统损伤有关,包括先天性感染导致的小头畸形和其他神经系统异常及成人脑膜脑炎。但ZIKV的致病机制并不完全明确,关于ZIKV入侵神经系统的机制也不明确,有研究认为ZIKV跨过血脑屏障入侵神经系统,感染神经祖细胞和神经前体细胞并减弱或阻碍神经元分化,从而导致神经损伤。ZIKV跨过血脑屏障的机制并不清楚,研究发现ZIKV跨越血脑屏障通透性没有降低,可能是通过胞吞胞吐依赖的复制途径和转胞吞作用入侵神经系统,但还没有确凿的证据。血脑屏障是由脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cell,BMECs）、周细胞（pericyte）和星形胶质细胞（astrocyte,AS）组成的选择性扩散屏障,本研究在前期研究基础上,通过体外分离树鼩脑微血管内皮细胞（BMECs）和星形胶质细胞（AS）,探究ZIKV对树鼩脑组织原代细胞的感染特性,同时建立体外屏障培养模式,验证ZIKV跨越血脑屏障通透性是否发生改变。首先,分离培养树鼩微血管内皮细胞（BMECs）和星形胶质细胞（AS）并进行免疫荧光染色鉴定;其次进行ZIKV感染BMECs和AS的体外实验,real-time PCR检测细胞和培养上清中的病毒载量,绘制病毒增殖曲线,并选取多个时间点采用real-time PCR 检测细胞因子 IL-6、IL8、IFN-α、IFN-β mRNA 的表达水平,以及 ZIKV感染 BMECs 后血脑屏障相关蛋白 claudin3、MMP-9、MMP-12、Cav-1、Mfsd2a mRNA的表达情况;最后,采用BMECs和AS建立体外屏障培养模式,ZIKV感染和模拟感染后评价体外屏障培养模式的完整性。结果显示:（1）采用本文所述方法分离培养的树鼩BMECs和AS纯度高,活性好,可用于下一步的实验研究;（2）增殖动力曲线表明ZIKV可在BMECs和AS中快速增殖,ZIKV感染BMECs 48h时达到峰值106copies/mL,ZIKV感染AS 60h达到峰值106copies/mL;（3）ZIKV感染BMECs后pPCR检测到细胞因子IL-6、IL8 mRNA水平增加,血脑屏障相关蛋白claudin3 mRNA水平0-6h表达上调,6-12h表达下调,12-48h表达上调,MMP-9、MMP-12保持持平,Cav-1在感染后0-12h下调,12-48h上调,Mfsd2a在感染后0-6h下调,6h-48h明显上调;（4）ZIKV感染AS细胞因子IL-6、IL8、IFN-α IFN-β mRNA表达水平均上调;（5）体外屏障培养模式通透性评价结果显示,ZIKV感染由BMECs建立的单层细胞培养模式,不同时间点在下室中均检测到ZIKVRNA,且不同时间点单层细胞培养模式的通透性没有变化,ZIKV感染BMECs和AS共培养模式,24h时通透性明显下降。结论:本研究成功建立了树鼩BMECs和AS的分离培养方法;ZIKV对树鼩BMECs和AS具有易感性,ZIKV能在树鼩BMECs和AS中复制并释放出子代病毒;ZIKV感染可激活BMECs和AS局部免疫应答,且没有破坏BMECs的紧密连接和内皮通透性,推测可能是通过转胞吞途径进入血脑屏障;ZIKV跨越BMECs后感染星形胶质细胞,可能导致其通透性降低。
郭毅[3]（2020）在《RIP1K通过调节VEGFD-VEGFR3信号通路参与缺血性脑卒中诱导的反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成》文中提出目的:RIP1K（receptor interacting protein 1 kinase,受体相互作用蛋白 1 激酶）是程序性坏死过程中的重要蛋白。前期研究结果表明,RIP1K基因沉默能够抑制脑缺血后反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成,且其机制可能与VEGFD（vascular endothelial growth factor D,血管内皮生长因子 D）-VEGFR3（vascular endothelial growth factor receptor 3,血管内皮生长因子受体3）通路有关。因此,本课题进一步研究RIP1K是否通过调节VEGFD基因,激活VEGFD-VEGFR3通路而参与调节缺血性脑卒中后胶质瘢痕形成;抑制RIP1K产生的减少胶质瘢痕形成的作用不依赖其神经保护作用;及其下游通路VEGFD-VEGFR3在缺血性脑卒中后胶质瘢痕形成中的作用。方法:在体内建立短暂性大脑中动脉阻塞（transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）模型,体外建立氧糖剥夺/再复氧（oxygen-glucose deprivation and reoxygenation,OGD/Re）模型进行研究。通过RIP1K慢病毒转染敲低RIP1K,或用RIP1K磷酸化激活特异性抑制剂Nec-1（Necrostatin-1）抑制RIP1K的磷酸化激活。使用VEGFR3抑制剂 Axitinib及VEGFR3特异性抑制剂SAR131675抑制VEGFR3的活性。EdU染色标记OGD/Re处理后新增的星形胶质细胞。通过免疫组织化学检测大鼠脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）后胶质瘢痕标志蛋白GFAP（glial fibrillary acidic protein,胶质纤维酸性蛋白）、neurocan、phosphacan 的表达及 RIP1K的敲低情况。通过免疫荧光检测OGD/Re后星形胶质细胞中胶质瘢痕标志蛋白neurocan、phosphacan的表达。Western Blotting用于检测体内及体外实验中GFAP、neurocan、phosphacan、VEGFD及VEGFR3的表达水平变化。基因芯片用于检测RIP1K基因沉默对于VEGFD基因Figf表达的影响。含VEGFD重组蛋白（400ng/ml）的培养基用于诱导原代星形胶质细胞中胶质瘢痕的形成。乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出率用于评价星形胶质细胞OGD/Re后细胞损伤情况。通过星形胶质细胞-神经元共培养实验检测神经元在OGD/Re诱导的星形胶质细胞中突触延伸情况。结果:（1）通过免疫组织化学验证大鼠大脑皮层中RIP1K基因沉默成功。RIP1K在tMCAO诱导的大鼠大脑皮层反应性星形胶质细胞及胶质瘢痕中表达增加,RIP1K基因沉默可以减少tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan的表达。EdU染色实验结果显示,RIP1K基因沉默可抑制OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞的增生。星形胶质细胞-神经元共培养结果显示RIP1K基因沉默有助于OGD/Re后反应性星形胶质细胞中神经元突触的延伸。（2）tMCAO 1天后开始给予Nec-1,连续7天或14天,能够分别明显减少tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan的表达及胶质瘢痕的厚度。（3）通过基因芯片检测发现,RIP1K基因沉默后,VEGFD基因Figf的表达受到抑制。且再复氧阶段给予Nec-1能够减少OGD/Re诱导的星形胶质细胞中VEGFD的表达。（4）进一步研究发现,VEGFD及VEGFR3在tMCAO诱导的大鼠大脑皮层梗死边缘区中的表达与胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan的表达都呈现递增趋势,且共定位现象明显。通过标记神经元（Map-2）和VEGFR3发现,VEGFR3与神经元的共定位不明显。（5）VEGFD重组蛋白（400ng/ml）诱导原代星形胶质细胞中胶质瘢痕的形成。VEGFR3的抑制剂能够抑制tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕及OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞中胶质瘢痕的形成。Axitinib能够减少小鼠脑缺血急性期脑梗死体积,改善行为学症状。SAR131675减少OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞中LDH漏出率。结论:（1）RIP1K在tMCAO诱导的大鼠大脑皮层反应性星形胶质细胞中上调。（2）RIP1K通过调节VEGFD基因,激活VEGFD-VEGFR3通路而促进脑缺血后反应性星形胶质细胞的增生及胶质瘢痕的形成。（3）RIP1K基因沉默或Nec-1延迟给药均可抑制脑缺血后反应性星形胶质细胞的增生及胶质瘢痕的形成,促进神经元轴突的延伸。（4）抑制VEGFR3-VEGFD信号通路能够抑制脑缺血后反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成。
陈鹏[4]（2020）在《碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究》文中研究表明研究背景与目的:腹腔高压症（intra-abdominal hypertension,IAH）指腹内压（intra-abdominal pressure,IAP）持续或反复病理性上升≥12mmHg。腹腔间隙综合征（abdominal compartment syndrome,ACS）则是指IAP持续≥20mmHg,并伴有新的器官功能障碍或失调。IAH/ACS分为原发性和继发性,原发性IAH/ACS的病因主要是腹腔/盆腔原发性疾病或直接损伤,继发性IAH/ACS的病因主要是全身炎症反应综合征、失血性休克、大面积烧伤等。继发性IAH/ACS大都具有低血容量需要大量液体复苏的特征,病理过程包括缺血再灌注损伤,炎症因子释放,毛细血管通透性增高、液体渗漏、组织脏器水肿等。IAH/ACS不仅导致腹腔内脏器损害,还可导致胸腔、颅腔远处脏器损害,如导致颅内压升高引起继发性脑损伤,具体机制可能与血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）破坏有关。临床上常见创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）合并休克的多发伤患者,复苏后引起IAH/ACS,两者互相影响加重脑损伤,导致预后不佳。碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）有广泛的生物学效应,它有助于血管形成、创伤愈合、组织修复、神经生长等。有研究发现在脑出血模型中,bFGF可与成纤维细胞生长因子受体（fibroblast growth factor receptor,FGFRs）结合,上调紧密连接（tight junctions,TJ）和粘附连接（adheren junctions,AJ）蛋白表达,保护血脑屏障,但具体机制不清楚。TBI合并IAH/ACS对血脑屏障的影响研究很少,本实验希望了解TBI合并IAH后对血脑屏障、颅内压的影响,探寻bFGF对损伤后血脑屏障的作用,并揭示其中的作用机制。我们拟使用“皮质控制损伤”模拟TBI及“失血性休克大量液体复苏联合腹腔注氮气模拟继发性IAH/ACS”的大鼠作为动物模型进行体内实验,以及体外培养人脑微血管内皮细胞进行糖氧剥离诱导实验。具体包括以下研究:实验一,继发性IAH/ACS模型建立及对血脑屏障影响;实验二,TBI合并IAH对血脑屏障影响及bFGF的作用及机制研究;实验三,bFGF对人脑微血管内皮细胞糖氧剥离后渗透性及凋亡的作用及机制研究。此研究将有助于揭示TBI合并继发性IAH破坏血脑屏障,升高颅内压的过程,并为bFGF治疗血脑屏障损伤提供理论基础。主要实验方法与实验步骤:1.继发性IAH/ACS模型建立及对血脑屏障影响通过失血性休克大量液体复苏联合腹腔注氮气建立继发性IAH/ACS大鼠模型,观察不同腹内压（IAP12mmHg,20mmHg）对颅内压、脑组织大体形态,脑MRI,脑含水量,血脑屏障渗透性的影响,用Western blotting和PCR检测损伤后模型血脑屏障表达ZO-1、β-catenin、MMP2、IL-1β等指标,评估不同IAP对血脑屏障的损伤程度及其影响颅内压的病理过程。2.TBI合并IAH对血脑屏障影响及bFGF的作用及机制研究在前述建立的继发性IAH基础上利用可控皮质打击法建立大鼠中型颅脑创伤模型。分为control组,combined（TBI+IAH）组,combined+bFGF组,combined+bFGF+PD173074组,combined+bFGF+PD98059组。观察各组损伤后对颅内压、脑含水量及血脑屏障渗透性的影响,用免疫荧光、Western blotting和PCR检测损伤后各组血脑屏障表达FGFR1/p-FGFR1、ZO-1、Claudin-5,Occludin、β-catenin、MMP9、MMP12、L-1β和TNF-α等指标。探讨bFGF对TBI合并IAH后血脑屏障的保护作用以及作用机制,包括结合的受体及激活下游信号通路,为临床治疗提供实验参考。3.bFGF改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）后渗透性及凋亡的作用及机制研究利用人脑微血管内皮细胞（HBMECs）进行体外实验。分组为control组,OGD/R组,OGD/R+bFGF组,OGD/R+bFGF+PD173074组,OGD/R+bFGF+PD98059组。观察各组OGD/R对HBMECs渗透性、凋亡、活力的影响,用免疫荧光,Western blotting和PCR检测损伤后各组HBMECs表达FGFR1/p-FGFR1、FGFR2/p-FGFR2、ERK/p-ERK、ZO-1、Claudin-5、Occludin、β-catenin、MMP2、MMP9、BAX、Bcl-2和Caspase-3等指标,观察bFGF对HBMECs在OGD/R后的渗透性、凋亡、活力影响及作用机制。主要研究结果:1.成功建立继发性IAH/ACS大鼠模型,发现IAH/ACS能引起血脑屏障损伤,导致颅内压升高。通过失血性休克大鼠大量液体复苏联合腹腔注氮气建立继发性IAH/ACS大鼠模型,ACS模型较IAH模型死亡率更高。IAH组与ACS组均引起颅内压增高,脑水肿及脑含水量增加,血脑屏障渗透性增加,血脑屏障表达特异TJ（ZO1）、AJ（β-catenin）下降,MMP2表达增强,引起血脑屏障破坏的炎症因子（IL-1β）增强。而导致颅内压增高及血脑屏障破坏方面两组间并无明显差异。2.bFGF可减轻TBI合并IAH后的血脑屏障破坏,降低颅内压,其作用机制可能是与BMECs上FGFR1结合,激活下游ERK通路完成。TBI合并IAH导致颅内压增高,脑含水量及血脑屏障渗透性增加。构成血脑屏障的BMECs表达p-FGFR1,p-ERK发生改变。给予bFGF激活p-FGFR1及下游p-ERK,上调AJ（ZO-1、Claudin-5、Occludin）、TJ（β-catenin）,下调MMP（MMP9、MMP12）,IL-1β,从而降低脑含水量,血脑屏障渗透性及颅内压。给予FGFR1拮抗剂（PD173074）,ERK拮抗剂（PD98059）可以逆转bFGF的保护作用。3.bFGF改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）后渗透性及凋亡,机制是与HBMECs上FGFR1结合,激活下游ERK通路完成。在OGD/R损伤导致HBMECs渗透性和凋亡增强,而对活力影响不大。OGD/R后HBMECs表达p-FGFR1,p-ERK发生改变,而p-FGFR2无变化。给予bFGF激活p-FGFR1及下游p-ERK,上调AJ（ZO-1、Claudin-5、Occludin）、TJ（β-catenin）,Bcl-2,下调MMP（MMP2、MMP9）、BAX、Caspase-3,从而降低HBMECs渗透性及凋亡细胞数。给予FGFR1拮抗剂（PD173074）,ERK拮抗剂（PD98059）可以逆转bFGF的保护作用。结论:1.成功构建动物模型（大鼠）,揭示了不同腹腔内压与颅内压的关系以及IAH/ACS可能通过血脑屏障破坏引起脑水肿、导致颅内压增高的病理过程。以与人类基因同源性的大鼠为动物模型,具有体积小,操作简单,花费少,实验试剂易制备或获得,可用于继发性IAH/ACS病理生理的相关研究。2.TBI合并IAH导致血脑屏障破坏,脑水肿,引起颅内压升高。bFGF能通过上调血脑屏障紧密连接,粘附连接相关蛋白,降低MMP及炎症因子而保护血脑屏障,减轻脑水及降低颅内压。其保护机制可能是通过与BMECs上FGFR1结合激活下游ERK信号通路发挥作用;3.体外培养HBMECs在OGD/R条件下渗透性及凋亡增强,bFGF通过与FGFR1结合激活ERK通路,上调AJ、TJ、MMP及凋亡蛋白（Bcl-2,BAX,Caspase-3）,降低HBMECs的渗透性和减少凋亡数量,对HBMECs损伤有保护功能。
刘雯雯[5]（2020）在《微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建及分子机制研究》文中研究表明背景:肺癌在我国的发病率和死亡率均高居首位。转移是肺癌高死亡率的最主要原因,而脑是肺癌最常发生的远处转移部位。肺癌脑转移是一系列复杂的病理级联过程,包括原发病灶中肿瘤细胞侵袭突破基底膜进入血循环,并随之转运到脑组织,滞留于脑微血管中的肿瘤细胞穿过血脑屏障进入脑实质,在该微环境中定植存活形成微小转移灶以及肿瘤血管形成等几个阶段。明确肺癌从原位发展至脑转移的每一个级联病理过程及涉及其中的详尽机制,无论对肺癌脑转移的早期诊断或是有效治疗手段开发都具有深刻意义。然而目前对肺癌脑转移的研究存在很大的局限性,现有的体外研究平台难以复现肺癌脑转移复杂的病理过程及转移微环境,而体内动物模型面临着难以可视化监测、通量低及伦理限制。因此,肺癌脑转移生物学研究亟需一个既能模拟体内微环境、再现复杂转移过程,又能实现高通量实时监测的研究平台。被公认为21世纪最重要的前沿科学技术之一的微流控芯片组织工程技术,凭借其可操控性强、微型高通量等优势有望为肺癌脑转移研究提供理想的新技术平台。因此,本研究拟基于微流控芯片技术构建肺癌脑转移仿生芯片,实现肺癌脑转移病理过程的可视化再现及实时监测,并与传统研究平台联合应用于肺癌脑转移分子机制研究,进一步阐明脑转移相关分子机制,并探讨微流控芯片组织工程技术在肺癌脑转移研究中的应用价值。本研究分为以下三部分。研究方法:1.微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建基于微流控芯片技术构建肺癌脑转移模型,由上游“肺”及下游“脑”两个仿生器官单元组成,上游“肺”模拟呼吸运动及气血交换,在接近体内生理环境下再现肺癌肿瘤细胞的发展及侵袭;下游“脑”通过微通道结构将血管腔与脑实质腔连接实现多细胞共培养,并由微泵控制形成连续的血管剪切力以构建脑重要功能结构—血脑屏障,在此基础上实时监测肺癌细胞的转移轨迹,为后续肺癌脑转移分子机制研究提供技术平台。2.肺癌高脑转移细胞系构建及其蛋白组学数据库建立通过将肺癌细胞系（PC9）对免疫缺陷小鼠进行“心内注射-分离脑转移瘤-原代培养获取脑转移肺癌细胞-再次心内注射”,如此循环3轮以富集肺癌细胞脑转移特征,从而获得肺癌高脑转移细胞系（PC9-Br M3）。通过应用TMT标记、高效液相色谱分级技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术,构建肺癌脑转移蛋白组学数据库,阐述肺癌脑转移前后的蛋白表达谱改变;通过对差异蛋白进行注释、功能分类、功能富集及聚类分析,进一步筛选关键分子;为明确肺癌脑转移的关键分子及可能机制提供依据。3.AKR1B10促进肺癌脑转移的分子机制研究在微流控仿生芯片新平台及传统体内外研究平台联合应用下,明确从蛋白组学数据库筛选出的关键分子AKR1B10（Aldo-keto reductase family 1 B10,醛酮还原酶家族1 B10）在肺癌脑转移中的作用及分子机制,为AKR1B10作为肺癌脑转移的诊疗新靶点提供有力的证据支撑。结果:1.微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建成功构建了肺癌脑转移微流控仿生芯片模型,实现了上游“肺”的呼吸节律、气血交换等主要生理功能模拟;实现了下游“脑”关键功能结构-血脑屏障的构建,具备生理屏障功能,在此基础上成功实现对肺癌细胞从上游“肺”侵袭进入循环、再随循环至下游靶器官“脑”并突破血脑屏障发生脑转移病理全过程的实时动态监测,为后续研究提供了新方法学平台。2.肺癌高脑转移细胞系的构建及其蛋白组学数据库的建立成功构建具备高脑转移能力及特性的肺癌脑转移细胞系,为后续建立脑转移数据库及肺癌脑转移分子机制研究提供了可靠的细胞系模型。通过应用TMT标记、高效液相色谱分级技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术,阐明了肺癌脑转移前后的蛋白表达谱改变,以差异倍数值变化超过1.3倍作为显着上调、小于1/1.3作为显着下调的变化标准,发现肺癌高脑转移细胞系与亲本细胞相比,200个蛋白显着上调,203个蛋白显着下调。通过蛋白互作网络分析、KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路与GO（Gene Ontology）富集分析等生物信息学分析手段对差异蛋白进一步筛选,并结合研究方向与脑转移功能相关,最终在建立的蛋白组学数据库中筛选出了AKR1B10、ALDH1A1、S100A4、MCAM、GSTM1、GPX4、ALDH1A1等关键分子,为明确肺癌脑转移过程中的关键分子及可能机制提供依据。3.AKR1B10促进肺癌脑转移的分子机制研究选取肺癌脑转移蛋白组学数据库中的关键差异蛋白之一AKR1B10进行多平台验证,发现无论在细胞系、仿生芯片模型还是临床患者血清标本中,AKR1B10的表达在脑转移组中均显着增高,提示其可以作为诊断肺癌脑转移的新分子标志物。联合仿生肺癌脑转移模型及传统体内外研究手段进行干预研究,进一步证实“AKR1B10可通过MAPK信号通路调控金属基质蛋白酶（MMP2,MMP9）表达升高,导致血脑屏障结构破坏,从而促进肿瘤细胞脑转移”的脑转移机制。结论:1.本研究成功构建了基于微流控芯片技术肺癌脑转移仿生模型,对肺癌细胞从原位侵袭进入循环,再随循环至下游靶器官并穿破血脑屏障发生脑转移病理全过程进行实时动态监测,实现了对复杂病理过程的可视化和动态观察,最大限度对体内微环境进行模拟,为后续肺癌脑转移分子机制研究提供了新的技术平台。2.成功构建肺癌高脑转移细胞系,应用蛋白质组学技术筛选出了可能在肺癌脑转移病理过程中发挥重要作用的关键分子,为后续分子机制验证研究提供了组学依据。3.在肺癌脑转移微流控仿生芯片新模型及传统研究平台联合应用下,蛋白AKR1B10首次被证实其促进肺癌脑转移的重要机制及其作为肺癌脑转移新分子标记物的诊断价值,对肺癌脑转移的诊疗具有重要意义。4.肺癌脑转移微流控仿生芯片在脑转移分子机制研究中的成功应用,展示了类器官芯片助力肿瘤学基础研究的巨大潜力。
蒋羽清[6]（2019）在《重组腺相关病毒载体介导的miR-21过表达调节调亡因子PDCD4促进神经元轴突再生的研究》文中指出第一部分 改良Allen’s法建立大鼠损伤挫伤型脊髓中度损伤模型目的:采用改良Allen’s法建立大鼠挫伤型脊髓中度损伤模型,观察脊髓损伤组、假手术组在脊髓损伤后后肢功能评分（BBB评分）及组织学区别。方法:使用脊髓打击器建立大鼠胸9挫伤型脊髓中度损伤模型,对脊髓损伤后后肢运动功能变化采用BBB评分法评价,βⅢ-tubulin免疫荧光染色对两组脊髓损伤后的组织学变化进行观察。结果:大鼠胸9脊髓挫伤后,假手术组的神经元结构基本完整,形状正常,分布匀称,细胞间质匀称,神经元排列较整齐;而SCI组可见神经元结构欠完整,神经突出基本消失,细胞间质模糊混乱。脊髓损伤组与假手术组的BBB评分差异有统计学意义（p<0.05）。结论:1.成功建立大鼠挫伤型脊髓中度损伤模型;2.BBB评分脊髓损伤组明显低于假手术组。第二部分 大鼠脊髓损伤后miR-21及其凋亡因子PDCD4、PTEN的表达目的:阐明大鼠脊髓损伤后miR-21的基因表达变化及凋亡因子PDCD4、PTEN的表达、时间分布和其在脊髓损伤中的作用。方法:60只成年大鼠,SPF级,体重为200-250g,损伤组采取改良Allen’s法建立大鼠T9挫伤型脊髓损伤模型,假手术组只做椎板切除术,各组造模后4h、8h、1d、3d、7d取材,运用Real-time PCR检测脊髓损伤前后miR-21的表达变化;同时采用Western-blot检测miR-21相关靶基因PDCD4和PTEN的表达,观察miR-21是否通过调控其靶基因PDCD4和PTEN的表达影响脊髓损伤的修复。结果:与假手术组相比,miR-21的表达水平在SCI后4小时、8小时和1天均低于正常组织,各组与假手术组相比均存在统计学差异（P<0.05）;而损伤后3天和7天miR-21的水平则显着高于假手术组（P<0.05）,呈现先降低再升高的变化趋势。PDCD4在损伤后1天表达增加,3天其蛋白表达水平达到高峰,损伤后7天表达水平有所下降。与假手术组相比,损伤后1天和3天PDCD4的表达量与损伤前比较具有统计学差异（P<0.01）。p-PTEN的表达在脊髓损伤后1天最高,损伤后3天表达量有所下降,损伤后7天基本降至损伤前水平;脊髓损伤后1天（P<0.01）和3天（P<0.05）的表达水平与假手术组相比存在统计学差异。p-PTEN在SCI后7天回落至脊髓损伤前的表达水平。结论:在SCI的一周时间内,miR-21表达增高PDCD4和PTEN的表达水平则下降,表明了 miR-21在继发性损伤阶段抑制了凋亡因子PDCD4和PTEN的表达,在促进损伤后修复和抑制胶质疤痕的形成中发挥了重要作用。PDCD4和PTEN的表达与miR-21在脊髓损伤后表达的相关性,表明miR-21能够通过调控凋亡因子抑制胶质疤痕、促进损伤后修复。第三部分 重组腺相关病毒载体介导miR-21过表达通过抑制凋亡蛋白PDCD4促进轴突再生目的采取改良Allen’s法建立大鼠挫伤型脊髓损伤模型,研究重组腺相关病毒载体RAAV-miRNA-21对靶蛋白PDCD4的调节作用以及对神经元轴突生长的影响。方法分离并培养胎鼠脊髓原代神经元。通过hU6-MCS-CMV-EGFP rAAV载体,分别将 rAAV-pri-miRNA-21、rAAV-in-miRNA-21、rAAV-nc-miRNA 感染胎鼠脊髓神经元,通过β-Ⅲ tubulin标记的免疫荧光检测各组神经元轴突生长情况,Western blot检测PDCD4表达。结果在用rAAV-in-miRNA-21转导的神经元培养中,神经元要么延长很短的神经突,要么完全不延长。相比之下,过表达miRNA-21的神经元与正常对照组或nc-miRNA组相比,神经突生长明显增加（图7）。量化所有神经元轴突平均长度结果表明,miRNA-21显着增加所有神经元轴突的平均长度（415±16.7mm）,而对照组（198±11.2mm）和 nc-miRNA 组（185±10.6mm）（p<0.05）。量化最长神经元轴突的平均长度结果表明,miRNA-21显着增加平均长度最长的神经元轴突（234±7.1mm）,而对照组（121±3.9 毫米）和 nc-miRNA 组（109±4.7 毫米）,分别（p<0.04）。Western blot分析显示,与对照组相比,PDCD4表达下降35%（p<0.05）,PTEN蛋白水平无明显变化。结论过表达miR-21通过调节靶蛋白PDCD4的表达,增加神经突的伸展,促进出生后大鼠脊髓神经元的神经突生长。
卢璐[7]（2019）在《丙戊酸干预发挥神经保护作用的实验研究》文中认为目的丙戊酸（Valproic Acid,VPA）作为一种经典的抗癫痫药物被广泛应用于临床,它同时还具有抑制细胞凋亡、减轻炎性反应、保护及营养神经元、减少胶质细胞增生等神经保护作用。脑型疟（Cerebral Malaria,CM）是恶性疟疾最严重的并发症,是疟疾患者死亡的主要原因,CM幸存患者有严重的神经系统后遗症。近年来,抗疟治疗取得了一定成效,但仍面临许多挑战,其中最重要的挑战之一是疟原虫对抗疟药物的抗性增加,因此,寻找降低其死亡率,防止CM发生及减轻CM患者的神经系统后遗症等新的治疗手段尤为重要。但VPA对脑型疟的作用尚不清楚。因此,本课题旨在探讨VPA对CM的神经保护作用。方法1.腹腔注射1×104伯氏疟原虫感染的红细胞到C57BL/6小鼠,建立实验性小鼠脑型疟模型,感染6天后,通过心脏取血后离心备用;2.体外培养C57BL/6胎鼠（E13.5天）神经干细胞,3天半量换液,6天后进行传代,培养第三代时,将其种植于多聚赖氨酸包被的24孔板中,3天后,加脑型疟小鼠血清和正常小鼠血清处理神经干细胞,同时加入1mM VPA,分化培基培养5天后,β-Ⅲ-tubulin与GFAP细胞免疫荧光染色、实时荧光定量PCR（β-Ⅲ-tubulin、GFAP）观察神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化的影响;3.体外原代培养C57BL/6小鼠海马神经元,3天半量换液,7天后加脑型疟小鼠血清和正常小鼠血清处理神经元,同时加入1mM VPA,培养3天后,光镜拍照,DCFH-DA检测活性氧水平,CytoTox96?非放射性细胞毒性检测试剂盒检测乳酸脱氢酶（Lactic Dehydrogenase,LDH）释放量,Tunel细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞,观察VPA对加有脑型疟小鼠血清的海马神经元的作用;4.腹腔注射1×104伯氏疟原虫感染的红细胞到C57BL/6小鼠,建立实验室小鼠脑型疟模型,感染第2天起腹腔注射VPA 300mg/kg,连续注射5天;计算生存率、快速鼠昏迷和行为量表（Rapid Murine Coma and Behavior Scale,RMCBS）进行评分;苏木素-伊红染色观察感染红细胞滞留及出血情况;取脑组织进行伊文斯蓝染色,比较血脑屏障的破坏程度;取脑组织提取RNA,比较IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;5.腹腔注射1×104伯氏疟原虫感染的红细胞到C57BL/6小鼠,建立实验室小鼠脑型疟模型,感染第2天起腹腔注射VPA 300mg/kg,连续注射5天;取脑组织提取RNA,比较脑源性神经营养因子（Brain Derived Neurotrophic Factor,BDNF）、神经胶质细胞源性的神经营养因子（Glial cell line-DerivedNeurotrophic Factor,GDNF）、神经生长因子（Nerve Growth Factor,NGF）等水平,并立即取脑组织进行膜片钳实验,观察VPA对海马区神经元膜电位的影响。结果1.成功体外提取培养胎鼠神经干细胞,细胞免疫荧光染色结果显示加脑型疟小鼠血清后β-Ⅲ-tubulin阳性比例降低,同时加入VPA后β-Ⅲ-tubulin阳性比例升高;加脑型疟小鼠血清后GFAP阳性比例升高,同时加入VPA后GFAP阳性比例降低。荧光实时定量PCR与免疫荧光染色抑制,显示加脑型疟小鼠血清后β-Ⅲ-tubulin含量降低,同时加入VPA后β-Ⅲ-tubulin含量升高;加脑型疟小鼠血清后GFAP含量升高,同时加入VPA后GFAP含量降低;2.成功体外培养海马神经元,结合光镜结果、活性氧含量、LDH释放率及Tunel染色结果可观察到:加入脑型疟小鼠血清后,光镜下海马神经元漂浮细胞增加,活性氧含量增加,LDH释放增加,Tunel凋亡细胞增加,而同时加入VPA后,海马神经元漂浮细胞降低,活性氧含量减少,LDH释放减少,Tunel凋亡细胞减少;3.成功建立实验性脑型疟模型,腹腔注射VPA后小鼠生存时间延长,快速鼠昏迷和行为学评分降低,同时H&E染色显示VPA治疗后感染红细胞滞留及出血减少;伊文斯蓝染色结果显示VPA治疗后小鼠血脑屏障破坏减轻;脑组织中IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α量均下调,IL-10量上调;4.成功建立实验性脑型疟模型,腹腔注射VPA后,脑组织中BDNF、GDNF量上调,NGF量无变化,膜片钳实验结果显示VPA处理后小鼠海马神经元突触后膜电位得到提高。结论1.通过免疫荧光染色及荧光实时定量可观察到:脑型疟小鼠血清抑制胎鼠来源神经干细胞向神经元方向分化,而VPA能在一定程度上挽救其抑制作用,使神经干细胞向神经元方向分化的比例升高;脑型疟小鼠血清促进其向星形胶质细胞分化,而VPA能在一定程度上使神经干细胞向星形胶质细胞分化的比例降低;2.脑型疟小鼠血清引起胎鼠来源神经元凋亡,而VPA能在一定程度上保护脑型疟小鼠血清引起的神经元凋亡;3.VPA腹腔注射能提高实验性脑型疟小鼠生存率,改善神经系统症状,减轻脑部炎症及感染红细胞滞留的情况,并减轻血脑屏障的破坏;4.VPA腹腔注射能提高实验性脑型疟能提高小鼠海马神经元突触后膜电位,对脑型疟小鼠发挥一定的神经保护作用。
王璇[8]（2019）在《EV71入侵树鼩血-脊髓屏障的机制研究》文中指出肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71）属于小RNA病毒科肠道病毒属,是引起婴幼儿手足口病主要病原体之一,其感染除引发手足口病症状外,还具有神经噬性,少数的重症感染者会出现严重的中枢神经系统并发症,如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿和急性迟缓性麻痹等。但EV71的致病机制尚不完全明确,关于EV71如何侵入神经系统并造成神经损伤的通路也还不清楚,有研究认为EV71病毒可能通过血-脑屏障（BBB）从血液传播到中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）,但还没有确凿的证据。本研究在前期研究基础上,通过体外分离培养树鼩脊髓微血管内皮细胞,探究EV71感染受体以及血-脊髓屏障结构通透性相关的分子特性,结合树鼩体内感染实验,以探讨EV71入侵神经系统的机制,这有助于临床重症患者治疗和疫苗研发。首先,体外分离纯化了树鼩的脊髓微血管内皮细胞（SCMECs）和脊髓星形胶质细胞（SCASTs）,经细胞免疫荧光鉴定其纯度。其后使用EV71分别感染这两种细胞,采用细胞免疫荧光检测EV71相应抗原分子,real-time PCR检测细胞和培养上清中的病毒载量并绘制病毒增殖曲线;主要研究EV71感染脊髓微血管内皮细胞的特征,并通过选取多个感染时间点利用real-time PCR检测EV71感染SCMECs相关受体和屏障相关蛋白的表达情况。其次,进行了树鼩的体内感染实验。共选取3月龄树鼩16只,实验组12只经灌胃和滴鼻模拟自然感染途径对其进行攻毒,隔天检测血清中的病毒载量,测量体温、体重。对照组4只以相同途径给予细胞维持液。检测攻毒第7天和20天的树鼩各组织中的病毒载量,免疫组化检测脑和脊髓组织中的EV71分布,并对各器官组织作病理检测;同时,通过注射伊文思蓝染料后取脑和脊髓制成冷冻切片,根据荧光范围分析屏障通透性变化情况。结果显示,建立的分离纯化方法可获得较高纯度的两种细胞并用于后续实验;EV71感染SCMECs和SCASTs后细胞均出现明显细胞病变,细胞免疫荧光在两种细胞中都能检测到EV71抗原分子;病毒增殖动力曲线表明EV71在两种细胞中均能快速增殖,且在感染24小时前后载量达到峰值（1×109copies/mL）,说明SCMECs和SCASTs能被EV71病毒感染。qPCR检测SCMECs的EV71感染受体和屏障相关蛋白,结果显示SCMECs细胞具有EV71感染主要受体:SCARB2、Anx2,并在感染后表达量升高;血-脊髓屏障相关的分子ZO-1和JAM-1表达量明显下降,Occludin、Claudin-1、Claudin-5 呈现先下降后上升的趋势,MMP-9、MMP-2 和 MMP-12在感染后表现出表达上调;MFSD2a在感染12h前出现明显上调,在12小时后出现快速的下调。树鼩体内感染实验显示在攻毒后表现出发热和生长变缓（消瘦）的症状,血清中持续检测到EV71载量,第7天达到峰值（1.31×105copies/mL）;在心、肝、脾、肺、肾、脑和脊髓中检测到EV71病毒载量,脑和脊髓中的病毒载量分别达到4.98×105 copies/mL和8.27×105 copies/mL,至感染20天仍能在脑和脊髓检测到病毒,免疫组化也在脑和脊髓中检测到EV71;病理结果显示各组织脏器中均出现一定程度的病理异常,特别是脑组织出现脑膜下血管充血,大脑皮质充血,神经细胞空泡变性和脊髓组织血管充血;冷冻切片结果也显示攻毒组树鼩脑和脊髓中伊文思蓝扩散至血管外渗入组织中,血管通透性明显增强。这些结果表明攻毒后树鼩产生了明显的病毒血症,EV71入侵至各组织引起组织病变,包括脑和脊髓;树鼩存在EV71感染相关受体,很可能介导了病毒的入侵过程;EV71的入侵伴随有血-脊髓屏障通透性的变化,这种变化很可能与其入侵神经并形成神经损伤密切相关。综上,本研究中分离的SCMECs和SCASTs可用于后续相关的实验研究;EV71可感染SCMECs和SCASTs,SCMECs具有EV71感染相关的受体,且在感染后出现明显的表达上调,血-脊髓屏障相关的分子蛋白表达变化明显;由此推断EV71可以通过感染SCMECs细胞或其他屏障相关的细胞入侵神经系统,由相关感染受体介导入胞,而EV71的入侵可破坏血-脊髓屏障的完整性或导致屏障通透性增加,进而造成脊髓组织的神经损伤。提示树鼩可以作为EV71研究的良好动物模型。
蒋路[9]（2018）在《抑制纹状体GABA能神经元的活性可促进脑缺血损伤后的康复》文中研究说明GABA能神经元是纹状体中数量上占比最大的一类神经元,作为一种抑制性神经元,在成体动物的大脑内参与了神经再生过程。有文献报道,在卒中后小鼠的康复期内,抑制纹状体神经元的活性,可以促进神经再生并改善行为学功能。然而,GABA能神经元在卒中后的亚急性期对小鼠的康复发挥着什么样的作用,且其作用的机理又是什么,并不清楚。本课题采用光基因的方法并结合GAD2-Arch-GFP和GAD2-ChR2-tdTomato两种转基因小鼠,特异性地调控卒中后纹状体GABA能神经元的活性,探究其活性对小鼠卒中后的神经功能康复的影响及其作用机制。1.本课题运用GAD2-Arch-GFP和GAD2-ChR2-tdTomato两种转基因小鼠,用530纳米的绿光和473纳米的蓝光分别刺激GABA能神经元上特异性表达的光敏感通道蛋白Arch和ChR2,从而实现对GABA能神经元活性的抑制和激活,达到特异性调控其活性的目的。为了证明激光确实可调控纹状体GABA能神经元的活性,在第一章中,我们在光刺激的同时,也记录了神经元的电活动。发现在GAD2-Arch-GFP转基因小鼠中,无论是从局部场电位还是神经元的放电频率,530纳米的绿光刺激确实降低了神经元的活性,且刺激过程中信号的能量也显着低于刺激前和刺激停止后的信号能量。而在GAD2-ChR2-tdTomato转基因小鼠中,473纳米的蓝光也可以诱发神经元放电,蓝光刺激过程中的神经元放电频率显着高于刺激前及刺激后的放电频率。最后,我们还通过免疫荧光染色的方法,进一步确认光刺激的细胞是GABA能神经元。至此我们证明了530纳米绿光及473纳米蓝光确实可调控纹状体GABA能神经元的活性。2.在第二章中,我们在脑缺血后一周开始光刺激,每天两次,每次15分钟,共7天。在卒中之前的一天及卒中后的第1,3,7,14天,进行神经功能评分来评估卒中小鼠神经功能的康复。结果显示,跟对照组相比,抑制纹状体GABA能神经元的活性可改善卒中后神经功能的康复,且减少了脑萎缩体积（p<0.05）。而兴奋纹状体GABA能神经元的活性反而加重了缺血后的脑损伤,并相比对照组有更大的脑萎缩体积。旷场实验也证明了抑制纹状体GABA能神经元的活性可重建卒中后小鼠的运动功能。3.在第三章中,我们主要通过免疫组化的方法检测脑水肿、血管密度和细胞形态学的改变,来探究光抑制纹状体GABA能神经元活性促进卒中后神经功能康复的原因。我们从神经再生及神经保护两个方面分别进行探讨。结果显示,在抑制组中并没有检测到明显的神经再生现象,而是发现,相比对照组,抑制纹状体GABA能神经元的活性促进了梗死边缘区CD31+的微血管的密度并显着降低了梗死边缘区TUNEL+的细胞数目（p<0.05）,而兴奋纹状体GABA能神经元得到了相反的结果。4.为了进一步探讨抑制纹状体GABA能神经元的活性促进血管密度增加的机制,在第四章中我们检测了与血管生长密切相关的一些营养因子的表达,包括bFGF,VEGF,PDGF及BDNF。PCR结果发现相比对照组而言,抑制组中唯独bFGF的表达得到了显着上调,且兴奋纹状体GABA能神经元还降低了bFGF的表达。Western blot检测及免疫荧光染色结果进一步验证了抑制组中梗死边缘区bFGF的上调（p<0.05）,且在兴奋组中出现了梗死边缘区bFGF的下调。染色共定位结果显示,绝大多数的bFGF都共定位在血管内皮上,提示光刺激后梗死边缘区增多的bFGF主要是由血管内皮细胞分泌而来。5.为了研究清楚GABA能神经元的活性如何影响bFGF表达的升高,我们设计了离体实验,包括神经元/星形胶质细胞/血管内皮细胞、神经元/星形胶质细胞、神经元/内皮细胞三种不同的体外共培养体系。530纳米绿光抑制纹状体GABA能神经元的活性唯独在三细胞共培养体系中上调了bFGF的表达,但类似的现象并没有在神经元/星形胶质细胞或星形胶质细胞/血管内皮细胞的双细胞共培养体系中发现。此外,从绿色光刺激过的三种细胞培养体系中收集的条件培液可以保护糖氧剥夺模型损伤后的另一组三细胞共培养体系的细胞活性,进一步提示抑制GABA能神经元的活性对卒中后神经功能的改善及脑萎缩体积的减少可能是光刺激后上调的bFGF发挥的神经保护作用的结果。综上所述,我们对GABA能神经元活性如何影响卒中后神经功能的康复及其作用机制进行了深入的研究。结果显示抑制纹状体GABA能神经元的活性可以促进卒中后小鼠神经功能的改善并减少脑萎缩体积,而这些保护作用可能与抑制GABA能神经元活性促进血管内皮细胞上调的营养因子bFGF有关,而且这种调控依赖于星形胶质细胞的存在。进一步揭示了神经血管单元在信号调控及神经功能调控中发挥了重要的作用,也为后期脑卒中的临床应用提供了新的思路及理论依据。
李奉华[10]（2013）在《槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2及成纤维细胞CTGF表达影响的信号通路机制研究》文中提出摘要第一章槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响目的：研究槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响。方法：体外培养、扩增口腔粘膜上皮和成纤维细胞,通过细胞形态学及角蛋白和波形丝蛋白免疫组织化学染色等鉴定细胞；MTT实验检测高浓度槟榔碱短时间干预及低浓度槟榔碱长时间作用对上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响；流式细胞术分析槟榔碱干预对上皮细胞和成纤维细胞的细胞周期的影响；彗星实验检测槟榔碱对上皮细胞和成纤维细胞DNA损伤的影响。结果：所培养的细胞具有典型的上皮细胞和成纤维细胞形态,角蛋白和波形丝蛋白染色阳性。高浓度（0.2mM-0.8mM）槟榔碱短期（0-72小时）作用于上皮细胞和成纤维细胞后,上皮细胞随槟榔碱浓度的增加及作用时间延长而活力下降,形态变化明显,差异具有统计学意义（P<0.05）；成纤维细胞在槟榔碱作用后活力下降不明显及形态无明显改变,差异不具有统计学意义（P>0.05）。在对细胞周期影响方面,0.8mmM槟榔碱干预48小时导致了上皮细胞位于G2/M期的比例相比对照组明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,而对成纤维细胞周期的改变影响不明显,差异不具有统计学意义（P>0.05）。0.6mM槟榔碱干预24小时可诱导上皮细胞出现凋亡,呈现剂量和时间的依赖性,差异具有统计学意义（P<0.05）；但诱导成纤维细胞凋亡作用不明显,差异不具有统计学意义（P>0.05）。低浓度槟榔碱显着抑制上皮细胞生长的条件是0.1mM作用12天后,差异具有统计学意义（P<0.05）；此浓度槟榔碱干预相同时间对成纤维细胞生长影响无明显影响,差异不具有统计学意义（P>0.05）。各浓度槟榔碱作用成纤维细胞24小时后,成纤维细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）；上皮细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,且与浓度呈依赖关系,浓度越高,DNA损伤越严重。结论：1、高浓度槟榔碱短时间干预能够抑制上皮细胞增殖,诱导上皮细胞凋亡,细胞周期在G2/M期发生阻滞,对DNA损伤作用呈剂效依赖关系。2、高浓度槟榔碱短时间干预对成纤维细胞增殖,凋亡及DNA损伤均无明显影响。3、低浓度槟榔碱干预到第12天后上皮细胞活细胞数明显下降,而成纤维细胞活细胞数无明显改变。第二章槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2表达的影响及其信号通路机制研究目的：探讨槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2表达的影响及其可能机制。方法：应用Western blotting、RT-PCR和明胶酶谱法,检测高浓度槟榔碱（0.2mM-0.8mM）分别短时间（10分钟）和低浓度槟榔碱（0.1mM）长时间（24小时）处理口腔粘膜上皮细胞后MMP-2的表达。在O.1mM槟榔碱干预上皮细胞检测MMP-2表达前,用ERK、PI3K、 p38MAPK、c-JNK和NF-κβ信号通路抑制剂PD98059,LY294002,U0126,N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）, SB203580,SP600125和Bayl1-7082分别预处理口腔粘膜上皮细胞,揭示槟榔碱影响上皮细胞MMP-2表达的信号通路机制。结果：高浓度槟榔碱（0.2mM-0.8mM）分别短时间（10分钟）处理口腔粘膜上皮细胞后,细胞继续培养12小时,与对照组相比MMP-2表达显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且与槟榔碱具有浓度依赖性。低浓度槟榔碱（0.1mM）长时间（24小时）处理口腔粘膜上皮细胞后,细胞继续培养24小时,MMP-2表达显着高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。P13K信号通路抑制剂LY294002能够抑制低浓度（O.1mM）槟榔碱诱导MMP-2表达的能力,且呈浓度依赖性,而ERK信号通路抑制剂PD98059无此作用。p38MAPK、c-JNK和NF-κβ信号通路抑制剂SB203580、SP600125、Bay11-7082能抑制低浓度（0.1mM）槟榔碱诱导MMP-2表达的能力,而NAC和U0126则无此作用。结论：1、高浓度或低浓度槟榔碱长时间或短时间处理口腔粘膜上皮细胞都能导致MMP-2蛋白表达上调；2、低浓度槟榔碱长时间处理口腔粘膜上皮细胞诱导MMP-2蛋白表达上调的机制可能与PI3K、p38MAPK、c-JNK和NF-κβ等信号通路有关。第三章槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞CTGF表达影响的信号通路机制及姜黄素影响CTGF表达作用的研究目的：观察槟榔碱干预后口腔粘膜成纤维细胞CTGF的表达,探讨姜黄素拮抗槟榔碱诱导成纤维细胞CTGF表达的可能机制。方法：免疫组织化学法检测20例口腔粘膜下纤维性变患组织中CTGF表达情况。Western blot检测槟榔碱长时间和短时间作用对口腔粘膜成纤维细胞CTGF表达的影响,以及使用PD98059（12.5、25、50μM）、SB203580（10μM）、SP600125（10μM）、Bay11-7082（10μM）和NAC（5mM）等信号通路抑制剂观察槟榔碱影响CTGF表达的信号机制。使用姜黄素干预并检测其对槟榔碱诱导口腔粘膜成纤维细胞CTGF表达上调作用的影响。结果：CTGF在口腔粘膜下纤维性变患者口腔粘膜组织中的表达显着高于正常粘膜组织,差异具有统计学意义（P<0.05）。不同浓度槟榔碱干预成纤维细胞后,Western blot检测结果表明槟榔碱促进了CTGF表达,且O.1mmM的槟榔碱作用2小时后CTGF蛋白增加约2.5倍。O.1mM槟榔碱作用口腔粘膜成纤维细胞不同时间后,蛋白质印迹法检测结果表明口腔粘膜成纤维细胞中CTGF最高表达水平发生在O.1mM槟榔碱作用2小时时,此后下降。Western blot检测不同信号通路抑制剂干预后CTGF表达,结果表明Bayll-7082、SP600125、SB203580和NAC等抑制剂显着的降低了槟榔碱诱导CTGF表达,但PD98059无此作用。蛋白质印迹实验结果表明姜黄素提前干预口腔粘膜成纤维细胞后,槟榔碱诱导口腔粘膜成纤维细胞CTGF表达减少,且姜黄素是以剂量依赖性的方式降低槟榔碱诱导的CTGF的表达,在姜黄素浓度达到10μM时,CTGF表达水平就已经低于正常对照组。结论：1、TGF在口腔粘膜下纤维性变组织中的表达显着高于对照组。2、槟榔碱诱导成纤维细胞CTGF表达增加作用呈剂效和时效依赖性,可能与NF-kβ、JNK、p38APK信号通路有关。3、姜黄素可以拮抗槟榔碱诱导成纤维细胞CTGF的表达。
二、碱性成纤维细胞生长因子上调原代培养鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、碱性成纤维细胞生长因子上调原代培养鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达(英文)（论文提纲范文）
（1）牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇文献综述 |
| 综述一 缺血性中风背景下的神经血管单元 |
| 1. 缺血性中风的研究现状 |
| 2. 神经血管单元的组成 |
| 3. 在正常和低氧条件下的生理学 |
| 4. 缺血性脑卒中的实验模型 |
| 5. 基于神经血管单元的治疗策略 |
| 6. 参考文献 |
| 综述二 中药抗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 一. 植物药 |
| 1.1 人参 |
| 1.2 栀子 |
| 1.3 姜黄 |
| 1.4 丹参 |
| 1.5 黄芪 |
| 1.6 川芎 |
| 1.7 地黄 |
| 1.8 黄连 |
| 二. 动物药 |
| 2.1 牛黄 |
| 2.2 麝香 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 下篇 实验研究 |
| 实验一 “神经血管单元”体外模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 实验二 牛黄及其有效成分对单独培养的神经元、星形胶质细胞、内皮细胞的细胞毒性 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 牛磺酸和熊去氧胆酸对神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）树鼩原代BMECs和AS的分离培养及ZIKV感染特性的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.1 ZIKV生物学特性 |
| 1.2 ZIKV的流行病学 |
| 1.3 ZIKV感染的临床症状和并发症 |
| 1.4 ZIKV感染动物模型研究现状 |
| 1.5 ZIKV感染和血脑屏障的关联 |
| 第一部分 树鼩脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞分离培养鉴定 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMECs)分离培养 |
| 1.2.2 脑星形胶质细胞(Astrocytes,AS)分离培养 |
| 1.2.3 脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞的纯化培养 |
| 1.2.4 脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞的形态学观察及免疫荧光染色鉴定 |
| 1.2.4.1 形态学观察 |
| 1.2.4.2 免疫荧光染色鉴定 |
| 1.2.5 CCK-8法测定脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞生长曲线 |
| 1.2.6 脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞冻存、复苏 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞形态学观察 |
| 2.2 细胞免疫荧光染色 |
| 2.3 树鼩脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞生长曲线 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 ZIKV感染树鼩脑星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 病毒 |
| 1.1.3 试剂及材料 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 ZIKV病毒增殖及滴度测定 |
| 1.2.2 病毒增殖动力曲线 |
| 1.2.3 ZIKV感染树鼩脑星形胶质细胞和微血管内皮细胞的相关特性 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 ZIKV感染的增殖动力曲线 |
| 2.2 ZIKV感染产生细胞因子 |
| 2.3 ZIKV感染BMECs血脑屏障相关蛋白的表达 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 体外屏障培养模式建立及ZIKV感染的特性 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞和病毒 |
| 1.1.2 试剂及材料 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 体外屏障培养模式构建 |
| 1.2.2 体外屏障培养模式通透性评价 |
| 1.2.3 ZIKV感染体外屏障培养模式 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 体外屏障培养模式构建和通透性评价 |
| 2.2 ZIKV感染体外屏障培养模式通透性的变化 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 英文缩略语表 |
| 附录二 主要细胞培养液配制 |
| 致谢 |
| 研究生简历 |
（3）RIP1K通过调节VEGFD-VEGFR3信号通路参与缺血性脑卒中诱导的反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 1. 缺血性脑卒中与星形胶质细胞 |
| 2. RIP1K在缺血性脑卒中中的研究进展 |
| 3. VEGFD-VEGFR3信号通路 |
| 4. 本课题提出的假说 |
| 二、本课题研究内容 |
| 三、本课题创新点 |
| 四、研究意义及研究价值 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要试剂 |
| 2.1 试剂 |
| 2.2 抗体 |
| 2.3 试剂盒 |
| 3. 主要仪器 |
| 4. 实验溶液配制 |
| 5. 实验方法 |
| 5.1 动物实验 |
| 5.2 细胞实验 |
| 5.3 RIP1K基因沉默 |
| 5.4 WesternBlotting检测 |
| 5.5 基因芯片 |
| 6. 统计方法 |
| 第一部分 RIP1K基因沉默减少脑缺血/再灌注诱导的星形胶质细胞增生和胶质瘢痕的形成 |
| 结果 |
| 1. RIP1K在tMCAO诱导的大鼠大脑皮层反应性星形胶质细胞及胶质瘢痕中表达增加 |
| 2. RIP1K基因沉默抑制脑缺血/再灌注后反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成 |
| 3. RIP1K基因沉默促进神经元突触在OGD/Re诱导的星形胶质细胞胶质瘢痕中延伸 |
| 小结 |
| 第二部分 Nec-1延迟给药抑制tMCAO诱导大鼠大脑皮层胶质瘢痕的形成 |
| 结果 |
| 1. Nec-1延迟给药减少tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕标志蛋白的表达 252. Nec-1延迟给药降低tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕厚度 |
| 2. Nec-1延迟给药降低tMCAO诱导的大鼠大脑皮层胶质瘢痕厚度 |
| 小结 |
| 第三部分 RIP1K调节VEGFD基因的表达 |
| 结果 |
| 1. RIP1K基因沉默下调OGD诱导的星形胶质细胞中VEGFD基因Figf |
| 2. Nec-1抑制OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞中VEGFD的表达 |
| 小结 |
| 第四部分 VEGFD-VEGFR3在tMCAO或OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞中的分布及表达 |
| 结果 |
| 1. VEGFD-VEGFR3及胶质瘢痕标志蛋白在OGD/Re诱导的反应性星形胶质细胞中表达及变化 |
| 2. VEGFD及VEGFR3在tMCAO诱导的大鼠大脑皮层中表达及变化 |
| 3. VEGFR3在大鼠大脑皮层神经元中的表达 |
| 小结 |
| 第五部分 VEGFD-VEGFR3通路参与脑缺血/再灌注损伤诱导的胶质瘢痕的形成 |
| 结果 |
| 1. VEGFD重组蛋白诱导原代星形胶质细胞增生及形成胶质瘢痕 |
| 2. VEGFR3抑制剂减少tMCAO或OGD/Re诱导的胶质瘢痕的形成 |
| 3. VEGFR3抑制剂对缺血性脑损伤及星形胶质细胞的保护作用 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 VEGF-VEGFR信号通路及其抑制剂的应用 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间发表文章 |
| 致谢 |
（4）碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 腹腔高压后破坏血脑屏障,引起颅内压增高的作用观察 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 颅脑创伤合并腹腔高压后对血脑屏障影响及碱性成纤维细胞生长因子的作用及机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 碱性成纤维细胞生长因子改善人脑微血管内皮细胞糖氧剥离后渗透性及凋亡的作用及机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 腹腔高压对远处脏器影响研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述 颅脑创伤和血脑屏障关系概述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（5）微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 芯片的设计 |
| 2.1.1 上游仿生“肺” |
| 2.1.2 下游仿生“脑” |
| 2.2 芯片的制作和处理 |
| 2.3 细胞常规培养、传代、冻存和复苏 |
| 2.4 绿色荧光蛋白-荧光素酶稳定表达肺癌细胞株构建 |
| 2.5 基于微流控仿生芯片的细胞培养和效能验证 |
| 2.5.1 细胞培养 |
| 2.5.2 小分子葡聚糖渗透实验 |
| 2.5.3 跨膜电阻检测分析 |
| 2.5.4 细胞免疫荧光 |
| 2.5.5 细胞示踪 |
| 2.6 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.微流控仿生芯片肺癌脑转移模型 |
| 2.仿生“脑”—血脑屏障效能验证 |
| 2.1 血脑屏障生理结构分析 |
| 2.2 细胞活性分析 |
| 2.3 血脑屏障效能验证 |
| 3.仿生芯片肺癌脑转移病理过程 |
| 3.1 肺癌细胞突破血脑屏障实时监测 |
| 3.2 肺癌细胞脑转移前后表型改变 |
| 3.3 脑转移微环境改变 |
| (四)讨论 |
| (五)小结 |
| (六)参考文献 |
| 第二部分 肺癌高脑转移细胞系构建及其蛋白组学数据库建立 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 动物 |
| 1.4 材料 |
| 2.方法 |
| 2.1 基于动物模型肺癌高脑转移细胞系的构建 |
| 2.1.1 肺癌脑转移动物模型的构建 |
| 2.1.2 脑转移肺癌细胞的分离及培养 |
| 2.1.3 脑转移肺癌细胞的循环富集 |
| 2.2 蛋白质组学数据库构建 |
| 2.2.1 蛋白组学测序 |
| 2.2.2 生物信息学分析 |
| 3.统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.肺癌高脑转移细胞系的构建 |
| 2.蛋白质组学数据库的构建 |
| 2.1 质谱质量控制检测 |
| 2.2 生物信息学分析结果 |
| (四)讨论 |
| (五)小结 |
| (六)参考文献 |
| 第三部分 AKR1B10促进肺癌脑转移的分子机制研究 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 动物 |
| 1.4 临床手术标本及血清样本 |
| 1.5 材料 |
| 1.6 小干扰及慢病毒序列 |
| 1.7 试剂配制 |
| 2.方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 Western Blot |
| 2.3 芯片细胞免疫荧光:参见第一部分 |
| 2.4 ELISA酶联免疫吸附测定 |
| 2.5 小干扰RNAi转染细胞 |
| 2.6 慢病毒液转染细胞 |
| 2.7 Transwell穿内皮细胞侵袭实验 |
| 2.8 划痕实验 |
| 2.9 动物实验:裸鼠心内注射参见第二部分 |
| 2.10 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.AKR1B10在肺癌脑转移中呈高表达水平 |
| 2.肺癌高脑转移细胞具备更强的穿透血脑屏障能力 |
| 3.干扰AKR1B10能显着抑制体内外肺癌脑转移病理过程 |
| 4.AKR1B10通过MAPK(MEK/ERK)信号通路调控金属基质蛋白酶MMP2、MMP9表达升高导致血脑屏障结构破坏 |
| (四)讨论 |
| (五)小结 |
| (六)参考文献 |
| 综述 肺癌脑转移病理过程及分子机制 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（6）重组腺相关病毒载体介导的miR-21过表达调节调亡因子PDCD4促进神经元轴突再生的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 改良Allen's法建立大鼠挫伤型SCI模型 |
| 材料与方法 |
| 1.1 实验材料和试剂 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 大鼠脊髓损伤(SCI)模型的构建 |
| 1.2.2 术后动物饲养及护理 |
| 1.2.3 术后观察指标及方法 |
| 1.2.4 组织学观察(标本采集及免疫荧光染色) |
| 1.2.5 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.1 大鼠挫伤型SCI模型的成功建立 |
| 1.2 观察生理状态和大鼠运动功能的检测 |
| 1.3 组织免疫荧光染色观察 |
| 讨论 |
| 1. SCI模型动物的选定 |
| 2. 建立SCI模型方法的选定 |
| 3. 致伤节段及损伤程度的选择 |
| 4. 模型效果的评价 |
| 第二章 大鼠脊髓损伤后miR-21及凋亡因子PDCD4、PTEN的表达 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 2.1 实验材料和试剂 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验仪器 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 本实验中使用的引物序列 |
| 2.1.5 主要试剂配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组 |
| 2.2.2 动物模型的制备以及建模后处理同实验一。 |
| 2.2.3 实验样品采集 |
| 2.2.4 实时定量PCR检测脊髓组织中miR-21的表达 |
| 2.2.5 Western Blot检测脊髓组织中PDCD4和PTEN的表达 |
| 2.2.6 实验数据的统计学处理 |
| 结果 |
| 2.1 大鼠脊髓损伤后miR-21的表达 |
| 2.2 大鼠脊髓损伤后PDCD4、PTEN的表达 |
| 讨论 |
| 1. 脊髓损伤的治疗 |
| 2. miRNA在中枢神经系统的作用 |
| 3. miR-21参与疾病的主要机制 |
| 4. PDCD4的结构及功能 |
| 5. PTEN的结构及功能 |
| 第三部分 重组腺相关病毒载体介导miR-21过表达通过抑制凋亡蛋白PDCD4促进轴突再生 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 3.1 实验材料和试剂 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要实验仪器 |
| 3.1.3 主要实验试剂 |
| 3.1.4 本实验中使用的引物序列 |
| 3.1.5 本实验中使用的质粒 |
| 3.1.6 主要试剂配置 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞总RNA的提取 |
| 3.2.2 细胞总RNA反转录 |
| 3.2.3 RT-PCR检测细胞样品中miR-21的表达 |
| 3.2.4 脂质体转染实验 |
| 3.2.5 细胞总蛋白质的提取 |
| 3.2.6 细胞总蛋白质含量的测定(BCA法) |
| 3.2.7 大鼠脊髓神经元的分离与原代培养 |
| 3.2.8 rAAV-pri-miR-21感染大鼠脊髓神经元 |
| 3.2.9 大鼠脊髓神经元免疫荧光染色 |
| 3.2.10 Western Blot检测大鼠脊髓神经细胞中PDCD4和PTEN的表达 |
| 3.2.11 荧光素酶报告实验 |
| 3.2.12 实验数据的统计学处理 |
| 结果 |
| 3.1 胎鼠脊髓神经元原代培养及感染率 |
| 3.2 重组腺相关病毒载体成功过表达miR-21 |
| 3.3 miRNA-21过表达对PDCD4、PTEN的影响 |
| 3.4 miR-21过表达可促进轴突再生和突触形成 |
| 3.5 miR-21抑制靶蛋白PDCD4的表达 |
| 讨论 |
| 3.1 脊髓神经元应用rAAV-pri-miR-21的安全性及效果 |
| 3.2 miR-21对脊髓神经元PDCD4和PTEN表达的影响 |
| 3.3 miR-21对脊髓神经元轴突生长的影响 |
| 总结和展望 |
| 一、总结 |
| 二、不足及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 MicroRNA-21对脊髓损伤的保护作用机制研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 脊髓损伤简介 |
| 2.1 概念 |
| 2.2 MRI诊断 |
| 2.2.1 MRI诊断方法 |
| 2.2.2 MRI在脊髓损伤中的诊断价值 |
| 2.3 脊髓损伤的治疗 |
| 3. MicroRNA-21简介 |
| 3.1 概念 |
| 3.2 在疾病诊疗中的应用 |
| 4. MicroRNA-21对脊髓损伤的保护作用 |
| 4.1 microRNA-21在脊髓损伤中的抗凋亡作用 |
| 4.2 microRNA-21凋亡相关基因在脊髓损伤中的作用 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文和参加的课题 |
| 发表论文 |
| 参加的课题 |
| 英文缩略语表 |
| 致谢 |
（7）丙戊酸干预发挥神经保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、原代培养神经干细胞及海马神经元 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 主要试剂配制 |
| 1.1.3 孕13.5天C57BL/6小鼠的获取 |
| 1.1.4 胎鼠神经干细胞的分离、培养与纯化 |
| 1.1.5 胎鼠神经干细胞的冻存与复苏 |
| 1.1.6 胎鼠神经干细胞的分化培养 |
| 1.1.7 胎鼠神经干细胞的鉴定 |
| 1.1.8 孕17天C57BL/6小鼠的获取 |
| 1.1.9 胎鼠海马神经元的分离、培养与纯化 |
| 1.1.10 胎鼠海马神经元的鉴定 |
| 1.1.11 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 胎鼠大脑组织的分离 |
| 1.2.2 成功分离培养胎鼠神经干细胞 |
| 1.2.3 成功分离培养胎鼠海马神经元 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、VPA对脑型疟来源血清的体外研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 主要试剂配制 |
| 2.1.3 伯氏疟原虫的复苏及感染 |
| 2.1.4 小鼠外周血虫血率的监测 |
| 2.1.5 伯氏疟原虫的冻存 |
| 2.1.6 伯氏疟原虫的计数 |
| 2.1.7 C57BL/6小鼠脑型疟模型的建立 |
| 2.1.8 C57BL/6小鼠脑型疟血清的获取 |
| 2.1.9 VPA对加有脑型疟小鼠血清的神经干细胞的作用 |
| 2.1.10 VPA对加有脑型疟小鼠血清的神经元的作用 |
| 2.1.11 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 VPA对加有脑型疟小鼠血清的神经干细胞的作用 |
| 2.2.2 VPA对加有脑型疟小鼠血清的海马神经元的作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、VPA对实验性脑型疟小鼠的作用 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 主要试剂配制 |
| 3.1.3 C57BL/6小鼠脑型疟模型的建立 |
| 3.1.4 实验分组 |
| 3.1.5 小鼠生存率的计算 |
| 3.1.6 体重测定、快速昏迷和行为量表评分 |
| 3.1.7 苏木素-伊红组织染色 |
| 3.1.8 血脑屏障通透性(Blood Brain Barrier,BBB)的检测 |
| 3.1.9 脑组织中炎症因子及神经营养因子的检测 |
| 3.1.10 海马神经元膜电位变化 |
| 3.1.11 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 本研究时间轴图 |
| 3.2.2 小鼠生存率的变化 |
| 3.2.3 体重、RMCBS评分变化 |
| 3.2.4 脑组织中细胞滞留、出血及炎症因子的水平 |
| 3.2.5 BBB通透性测定 |
| 3.2.6 脑组织中神经营养因子的变化 |
| 3.2.7 海马区神经元膜电位的变化 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 脑型疟的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）EV71入侵树鼩血-脊髓屏障的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 树鼩脊髓星形胶质细胞细胞分离鉴定 |
| 1. 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 脊髓原代星形胶质细胞（Spinal cord Astroglia:SCASTs)分离 |
| 1.2.2 星形胶质细胞纯化培养 |
| 1.2.3 星形胶质细胞的形态学观察及鉴定 |
| 1.2.3.1 形态学观察 |
| 1.2.3.2 星形胶质细胞免疫荧光鉴定 |
| 1.2.4 MTT法测定星形胶质细胞生长曲线 |
| 1.2.5 星形胶质细胞冻存、复苏 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 形态学观察 |
| 2.2 细胞免疫荧光染色 |
| 2.3 树鼩星形胶质细胞生长曲线 |
| 3. 讨论 |
| 第二章 树鼩脊髓微血管内皮细胞分离鉴定 |
| 1. 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 树鼩脊髓微血管内皮细胞分离 |
| 1.2.2 脊髓微血管内皮细胞的纯化培养 |
| 1.2.3 脊髓微血管内皮细胞的形态学观察及鉴定 |
| 1.2.3.1 形态学观察 |
| 1.2.3.2 脊髓微血管内皮细胞免疫荧光鉴定 |
| 1.2.4 MTT法测定脊髓微血管内皮细胞生长曲线 |
| 1.2.5 脊髓微血管内皮细胞冻存和复苏 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 形态学观察 |
| 2.2 细胞免疫荧光染色 |
| 2.3 脊髓微血管内皮细胞生长曲线 |
| 3. 讨论 |
| 第三章 EV71感染树鼩脊髓微血管内皮细胞和星形胶质细胞 |
| 1. 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 病毒 |
| 1.1.3 试剂及材料 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 EV71病毒增殖 |
| 1.2.2 EV71病毒滴度测定 |
| 1.2.3 确定最佳感染复数 |
| 1.2.4 病毒增殖动力曲线测定 |
| 1.2.5 EV71感染脊髓微血管内皮细胞和星形胶质细胞的相关特性 |
| 1.2.5.1 免疫荧光检测EV71感染后细胞中的病毒颗粒 |
| 1.2.5.2 EV71感染相关受体及血-脊髓屏障相关蛋白表达测定 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 EV71感染的最佳感染复数 |
| 2.2 EV71感染细胞的增殖动力曲线 |
| 2.3 细胞免疫荧光检测EV71感染细胞 |
| 2.4 EV71感染相关受体及血-脊髓屏障相关蛋白表达测定 |
| 3. 讨论 |
| 第四章 EV71感染树鼩 |
| 1. 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 病毒 |
| 1.1.3 试剂及材料 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 动物选取 |
| 1.2.2 动物攻毒 |
| 1.2.3 尾静脉采血和体重体温测量 |
| 1.2.4 血清总RNA提取和血清EV71病毒载量检测 |
| 1.2.5 组织取样 |
| 1.2.6 各组织总RNA提取 |
| 1.2.7 Real-time PCR检测各组织中EV71病毒载量 |
| 1.2.8 各组织的病理切片检测 |
| 1.2.9 免疫组化检测脑和脊髓中的EV71 |
| 1.2.10 qPCR检测脊髓中屏障相关蛋白表达情况 |
| 1.2.11 伊文思兰染色检测血-脊髓屏障通透性 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 攻毒后树鼩的体温和体重变化情况 |
| 2.2 血清中EV71病毒载量 |
| 2.3 各组织病毒载量 |
| 2.4 各组织病理检测结果 |
| 2.5 免疫组化结果 |
| 2.6 感染后脊髓中屏障相关蛋白表达 |
| 2.7 伊文思兰染色检测血-脊髓屏障通透性 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 英文缩略语表 |
| 附录二 主要细胞培养溶液配制 |
| 致谢 |
| 研究生简历 |
（9）抑制纹状体GABA能神经元的活性可促进脑缺血损伤后的康复（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪论 |
| 第一章 光基因技术调控纹状体GABA能神经元的活性 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 转基因小鼠的鉴定 |
| 1.2.2 电极的制作和埋植 |
| 1.2.3 激光的刺激及神经元电活动的记录 |
| 1.2.4 切片及免疫组化染色 |
| 1.2.5 大脑内光刺激范围测定 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 转基因小鼠基因型鉴定 |
| 1.3.2 特定波长的激光可调控纹状体GABA能神经元的活性 |
| 1.3.3 GABA能神经元鉴定 |
| 1.3.4 小鼠脑内光刺激体积估算 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 本章小结 |
| 第二章 抑制纹状体GABA能神经元的活性促进小鼠卒中后的康复 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验设计 |
| 2.2.2 MCAO模型 |
| 2.2.3 神经功能评分 |
| 2.2.4 旷场实验 |
| 2.2.5 牺牲小鼠,取脑切片 |
| 2.2.6 焦油紫染色及脑萎缩体积的测定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 抑制纹状体GABA能神经元的活性,可促进卒中后小鼠神经功能的康复 |
| 2.3.2 抑制纹状体GABA能神经元的活性,可重建卒中后小鼠的运动功能 |
| 2.3.3 抑制纹状体GABA能神经元的活性,减少了脑萎缩体积 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 抑制纹状体GABA能神经元的活性促进梗死边缘区血管密度的增加 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 免疫荧光染色检测神经再生 |
| 3.2.2 TUNEL染色检测梗死边缘区凋亡细胞 |
| 3.2.3 CD31染色检测梗死边缘区血管密度 |
| 3.2.4 荧光定量及细胞计数 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 抑制纹状体GABA能神经元的活性增加了SVZ区Nestin+细胞的数量 |
| 3.3.2 抑制纹状体GABA能神经元的活性减少了SVZ区 DCX+细胞的数量 |
| 3.3.3 抑制纹状体GABA能神经元的活性减少了梗死边缘区DCX+细胞的数量 |
| 3.3.4 抑制纹状体GABA能神经元的活性不影响BrdU+/NeuN+双阳性细胞的数量 |
| 3.3.5 抑制纹状体GABA能神经元的活性减少了梗死边缘区TUNEL+细胞的数量 |
| 3.3.6 抑制纹状体GABA能神经元的活性增加了梗死边缘区的血管密度 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 抑制纹状体GABA能神经元的活性促进卒中后小鼠梗死边缘区bFGF的表达 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 主要试剂与相关溶液配制 |
| 4.2.2 脑样本的收集 |
| 4.2.3 RNA的提取 |
| 4.2.4 Real Time-PCR |
| 4.2.5 蛋白的提取 |
| 4.2.6 蛋白定量及Western |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 抑制纹状体GABA能神经元的活性可促进bFGF表达 |
| 4.3.2 抑制纹状体GABA能神经元的活性可促进b FGF蛋白水平的表达 |
| 4.3.3 梗死边缘区分泌增多的bFGF主要来源于血管内皮 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章总结 |
| 第五章 抑制纹状体GABA能神经元对OGD细胞损伤后保护的体外验证 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 主要试剂与相关溶液配制 |
| 5.2.2 神经元的原代培养 |
| 5.2.3 原代神经元及星形胶质细胞的共培养 |
| 5.2.4 原代神经元及血管内皮细胞的共培养 |
| 5.2.5 原代神经元、星形胶质细胞及血管内皮细胞共培养体系的建立 |
| 5.2.6 糖氧剥夺条件下的光刺激 |
| 5.2.7 乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞活性 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 GAD2-Arch-GFP转基因小鼠原代神经元的培养及鉴定 |
| 5.3.2 光刺激下双细胞培养体系及三种细胞培养体系的建立 |
| 5.3.3 光刺激三种细胞培养体系后的条件培液可提高OGD条件后细胞的活性 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章总结 |
| 全文总结 |
| 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 小鼠神经功能14分评分表 |
| 附录2 引物序列 |
| 附录3 中英文缩写字母表 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（10）槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2及成纤维细胞CTGF表达影响的信号通路机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 ABSTRACT 目录 缩略语对照表 前言 第一章 |
| 槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响 1 |
| 引言 2 |
| 材料与方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 5 |
| 结论 第二章 |
| 槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2表达影响的信号通路机制研究 1 |
| 引言 2 |
| 材料与方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 5 |
| 结论 第三章 |
| 槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞CTGF表达影响的信号通路机制及姜黄素影响CTGF表达作用的研究 1 |
| 引言 2 |
| 材料与方法 3 |
| 结果 4 |
| 讨论 5 |
| 结论 参考文献 综述一 参考文献 综述二 参考文献 攻读学位期间主要的研究成果 致谢 |
四、碱性成纤维细胞生长因子上调原代培养鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达(英文)（论文参考文献）
- [1]牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究[D]. 杜欣. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]树鼩原代BMECs和AS的分离培养及ZIKV感染特性的初步研究[D]. 黎晓慧. 北京协和医学院, 2020(05)
- [3]RIP1K通过调节VEGFD-VEGFR3信号通路参与缺血性脑卒中诱导的反应性星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成[D]. 郭毅. 苏州大学, 2020(02)
- [4]碱性成纤维细胞生长因子对颅脑创伤合并腹腔高压后血脑屏障的保护作用及机制研究[D]. 陈鹏. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(01)
- [5]微流控仿生芯片肺癌脑转移模型构建及分子机制研究[D]. 刘雯雯. 大连医科大学, 2020(02)
- [6]重组腺相关病毒载体介导的miR-21过表达调节调亡因子PDCD4促进神经元轴突再生的研究[D]. 蒋羽清. 苏州大学, 2019(05)
- [7]丙戊酸干预发挥神经保护作用的实验研究[D]. 卢璐. 天津医科大学, 2019
- [8]EV71入侵树鼩血-脊髓屏障的机制研究[D]. 王璇. 北京协和医学院, 2019(02)
- [9]抑制纹状体GABA能神经元的活性可促进脑缺血损伤后的康复[D]. 蒋路. 上海交通大学, 2018(01)
- [10]槟榔碱对口腔粘膜上皮细胞MMP-2及成纤维细胞CTGF表达影响的信号通路机制研究[D]. 李奉华. 中南大学, 2013(01)
标签：血脑屏障论文; 星形胶质细胞论文; 成纤维细胞生长因子论文; 血管内皮生长因子论文; 原代培养论文;